基因工程

绪论

一、基因工程研究进展

二、遗传物质的性质与存在方式

三、基因及基因表达

第一章 工具酶

第一节 限制与修饰酶

一、限制性内切酶

二、甲基化酶

第二节 DNA连接酶

第三节 聚合酶

一、DNA聚合酶

二、RNA聚合酶

第四节 核酸酶

第五节 核酸末端修饰酶

第六节 其他酶

第二章 分子克隆载体

第一节 质粒载体

一、概述

二、几种重要的质粒

第二节 噬菌体载体

一、入噬菌体

二、黏粒

三、丝状噬菌体

四、噬菌粒

第三节 真核生物载体

一、酵母载体

二、植物细胞载体

三、动物细胞载体

第四节 人工染色体

第三章 核酸提取与基因文库构建

第一节 核酸的制备

一、核酸的提取

二、核酸的检测

第二节 基因文库的构建

一、基因文库

二、构建基因文库的载体

三、基因组文库的构建

四、cDNA文库的构建

五、微量样品cDNA文库的构建

六、基因组文库与cDNA文库的适用范围与差别

第四章 靶基因的克隆策略

第一节 靶基因的克隆

一、靶基因的部分片段获取

二、PCR合成法

三、核酸探针筛选

四、基因功能筛选

五、图位克隆法

六、人工化学合成法

第二节 克隆基因的序列分析

一、DNA序列测定

二、基因序列分析

第五章 体外DNA重组

第一节 DNA重组

一、载体的选择

二、靶基因的获取

三、DNA的体外重组

第二节 重组DNA导入宿主

一、宿主的选择

二、重组DNA导入宿主

第三节 阳性重组体的筛选与鉴定

一、平板筛选法

二、电泳筛选法

三、PCR筛选法

四、测序确认

五、报告基因检测法

六、核酸探针筛选法

七、基因定点突变

第六章 靶基因的诱导表达

第一节 外源基因表达涉及的因素

一、正确的阅读框

二、靶基因的有效转录

三、靶基因转录的终止

四、mRNA的有效翻译

五、密码子的利用与偏爱

六、翻译后的修饰加工及表达蛋白的分泌

七、蛋白质大小与融合标签

第二节 大肠杆菌表达体系

一、表达载体

二、表达用的宿主菌

第三节 外源基因在大肠杆菌中的表达

一、表达重组载体的构建

二、外源基因的诱导表达

三、大肠杆菌中外源基因的表达类型

四、外源基因表达的检测

第四节 外源基因在真核生物中的表达

一、酵母表达体系

二、动植物细胞表达体系

第七章 表达蛋白的纯化

第一节 蛋白质纯化

一、细胞破碎

二、破胞后处理

三、蛋白质浓缩

四、蛋白质分离

第二节 蛋白质分析

一、SDS-PAGE分析

二、Westem杂交

三、蛋白质含量测定

四、蛋白质浓缩与贮存

第八章 转基因

第一节 植物转基因

一、植物转基因的载体

二、植物转基因的受体

三、DNA重组

四、外源DNA导入植物细胞

五、植物转基因筛选与植株分化

第二节 动物转基因

一、表达载体

二、哺乳动物细胞

三、外源基因导人动物细胞

四、外源基因的诱导表达

第九章 基因组、转录组和蛋白质组的研究

第一节 基因组

一、测序文库的构建

二、基因组测序

三、测序后数据组装

四、内洞修补、拼接

五、全基因组注释

第二节 转录组

一、微阵列技术

二、SAGE和MPSS技术

三、转录组测序技术

第三节 蛋白质组

一、双向电泳

二、生物质谱技术

三、SILAC技术

四、iTRAQ技术

五、蛋白质芯片技术

六、酵母双杂交技术

七、噬菌体展示技术

八、基因靶向

第十章 基因工程应用与思考

第一节 基因工程的应用

一、医药卫生

二、农牧业、食品工业

三、环境保护

第二节 转基因的安全性分析

一、剖析与转基因产品安全性有关的十大事件

二、转基因的安全性问题

三、转基因的安全性管理

参考文献

索引

《基因工程/高等学校生物技术、生物工程系列教材》系统阐述了基因工程的基本理论与实用技术，以基因工程四大要素（工具酶、载体、供体、受体）为基础，以基因工程操作流程为主线，涵盖了核酸提取、靶基因克隆、基因重组、基因诱导表达、表达蛋白质的纯化、动植物转基因，以及基因工程应用等内容。此外，还介绍了支撑该学科发展的一些常用和最新的技术，如各种电泳技术、第1～3代测序技术、噬菌体展示技术、酵母双杂交技术、RNA干扰技术、基因靶向技术，以及基因组、转录组、蛋白质组的基因表达谱的研究技术等前沿热点。
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