生物技术、生物工程综合实验指南

第一章植物细胞工程技术1

实验一植物组织培养常用培养基的配制及灭菌1

实验二植物组织快速繁殖技术——以脱毒快繁为例2

实验三植物细胞悬浮培养技术3

实验四聚乙二醇诱导植物原生质体融合5

实验五农杆菌介导的遗传转化8

第二章动物细胞工程技术11

实验一动物细胞培养基的配制与细胞计数11

实验二动物细胞原代培养——鼠成纤维细胞的分离与永生化13

实验三动物细胞继代培养、冻存和复苏15

实验四细胞系培养18

实验五外源基因在哺乳动物细胞系中的表达20

第三章微生物技术23

实验一水中细菌总数的测定23

实验二多管发酵法测定水中大肠菌群25

实验三废水硝化?反硝化生物脱氮31

实验四微生物吸附法去除重金属34

实验五有机污染物的微生物降解35

第四章基因工程技术39

实验一菌液培养和质粒提取39

实验二琼脂糖凝胶电泳42

实验三PCR扩增目的基因43

实验四从PCR产物中回收目的DNA片段45

实验五目的基因片段与载体连接（TA克隆）46

实验六感受态菌的制备47

实验七细菌转化49

实验八重组子的筛选与酶切鉴定50

第五章分子生物学应用技术54

实验一Southern杂交54

实验二Northern杂交56

实验三Western印迹59

实验四PCR引物设计63

实验五随机扩增多态性技术（RAPD）64

实验六限制性片段长度多态性技术（RFLP）65

实验七扩增片段长度多态性技术（AFLP）67

实验八简单序列重复技术（SSR）70

第六章蛋白质组学技术74

实验一等电聚焦电泳74

实验二SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳78

实验三磷酸化蛋白质组学——32P放射性标记检测80

实验四磷酸化蛋白质组学——PRO?QDiamond染色法82

实验五定量蛋白质组学——蛋白质同位素标记83

实验六定量蛋白质组学——荧光标记86

第七章生物芯片技术89

实验一基因表达谱芯片检测肺癌A549细胞89

实验二蛋白质芯片检测人肺癌A549细胞中细胞因子表达92

实验三组织芯片技术94

第八章发酵工程技术96

实验一发酵过程中微生物的菌体量与菌体密度及发酵液黏度测定96

实验二发酵过程中溶解氧的控制与测定99

实验三林可霉素发酵过程工艺控制103

实验四L?谷氨酸的发酵与提取108

实验五生物油脂发酵过程工艺控制111

第九章食品生物技术116

实验一葡萄酒酿造116

实验二酸奶酿造及乳酸快速测定117

实验三平菇生产技术119

第十章酶的分离提取与纯化技术121

实验一槭树叶蛋白酶活力测定121

实验二槭树叶蛋白酶分离纯化123

实验三槭树叶蛋白酶的氨基酸组成124

实验四槭树叶蛋白酶动力学126

实验五槭树叶蛋白酶抑制作用动力学127

第十一章酶固定化技术131

实验一固定化酵母乙醇发酵131

实验二固定化葡萄糖异构酶生产果葡糖浆134

实验三β?半乳糖苷酶的固定化及应用136

第十二章生物分离技术140

实验一银杏叶总黄酮提取、分离与初步鉴定140

实验二溶菌酶的提取、分离纯化及其活性测定145

实验三超临界萃取薄荷挥发油151

实验四荷叶生物碱提取与分离纯化153

实验五平菇多糖提取与分离纯化156

第十三章生物信息学基础159

实验一基因和基因组数据库159

实验二蛋白质数据库160

实验三同源性搜索163

实验四分子系统发生分析164

附录167

附录一法定计量单位和单位换算167

附录二常见缓冲液配制168

附录三离心机转速与相对离心力换算170

附录四色谱法常用数据173

附录五常用电泳缓冲液及凝胶加样缓冲液176

附录六植物组织培养常用培养基配方177

附录七常见市售酸碱浓度178

附录八主要的限制性核酸内切酶作用位点及切割形成DNA片段的平均大小179

附录九几种主要的质粒载体酶切位点及选择标记180

附录十常见元素的相对原子质量表185

附录十一化学试剂规格186

《普通高等教育"十二五"规划教材·生物科学生物技术系列生物技术生物工程综合实验指南》是生物技术、生物工程专业在四年级上学期开设的一门的专业必修综合性实验课程。《生物技术、生物工程综合实验指南》是生物技术、生物工程专业在四年级上学期开设的一门的专业必修综合性实验课程。 《生物技术、生物工程综合实验指南》由16章内容组成，主要包括细胞工程（植物细胞和动物细胞工程技术）、微生物实验技术、发酵工程、酶工程、基因工程、生物分离工程、食品生物技术、分子生物学技术、蛋白质组学技术、生物芯片技术和生物信息学基础等内容。实验内容基本覆盖了生物技术的上中下游的全过程，各个实验（模块）既是独立的，内容上又是联系的。【作者简介】邱业先，苏州科技学院化学与生物工程学院，院长 教授，(包括教学、科研、设计、生产、经营、管理等方面，重点说明相关教学经历及取得的成绩。) 主要从事酶学及生物技术、生物工程等方面的教学研究工作。主讲过本科和研究生的生物化学、分子生物学等课程，先后主持三项国家自然科学基金项目和省部级项目十余项。曾获省科技进步2等奖一项，3等奖一项。先后在有关刊物发表学术论文90余篇。编写全国统编本科教材5本。曾任江西省跨世纪学科带头人，江西省生化学会副理事长，江西省政府学位委员会委员。1996年获国务院特殊津贴，2001年获江西省优秀教师。先后招收硕士研究生25名（16名已毕业），博士研究生4名（1名已毕业）。