现代发酵微生物实验技术

第一章显微技术

第一节显微观察

一、相差显微镜

实验11相差显微镜的使用

二、荧光显微镜

实验12荧光显微镜的使用

三、电子显微镜

实验13细菌、酵母菌超薄切片的透射电镜观察

实验14噬菌体的透射电镜观察

实验15质粒DNA的透射电镜观察

实验16酵母细胞的扫描电镜观察

第二节显微摄影

实验17显微摄影、菌落摄影和凝胶摄影

第三节放射自显影

实验18硝酸纤维素滤纸上标记DNA的放射自显影

第四节显微操作技术用于单细胞分离

实验19显微操纵器用于单细胞分离

实验110显微操纵器用于酵母子囊的解剖及子囊孢子单孢化

实验111玻璃微型工具的制作

第五节流式细胞仪测定细胞核内DNA的含量

实验112流式细胞仪计数法

第二章微生物细胞特殊结构的观察

第一节染色技术

一、染色的基本原理

二、染料

三、染色

实验21真菌的荧光染色与观察

第二节细胞主要结构成分的分离与观察

实验22革兰阳性细菌细胞壁的制备

实验23酵母细胞壁甘露聚糖的制备

实验24细胞壁的形态观察

实验25革兰阴性菌细胞外膜蛋白的分离

实验26细菌荚膜的观察

实验27细菌鞭毛的观察

实验28微生物细胞核的观察

实验29细菌染色体DNA的分离与观察

实验210异染颗粒的观察

实验211酵母细胞内脂肪颗粒和肝糖颗粒的观察

实验212酵母液泡及线粒体的提取

第三节芽孢、子囊孢子和假菌丝的观察

一、芽孢

实验213细菌芽孢形成及发芽的观察

实验214伴孢晶体的观察

二、酵母子囊孢子

实验215酵母子囊孢子的形成及观察

实验216酿酒酵母单倍体细胞的制备与鉴定

三、流式细胞术

实验217酿酒酵母染色体倍性鉴定

四、酵母假菌丝

实验218酵母假菌丝的观察

第三章噬菌体

实验31噬菌体的分离与纯化

实验32高效价噬菌体原液的制备

实验33溶源菌的鉴定

实验34抗噬菌体产α淀粉酶菌株的选育

第四章标记菌种的获得与应用

第一节富集培养技术在获得标记菌种中的应用

一、营养缺陷型富集法在原核细胞中的应用

实验41芽孢杆菌营养缺陷型的筛选

二、营养缺陷型富集法在真核细胞中的应用

实验42酵母营养缺陷型的筛选

实验43青霉菌营养缺陷型菌株的筛选

三、浓度梯度法富集抗性突变株

四、富集法在研究次级代谢的重组DNA技术中的应用

第二节营养缺陷型标记菌种的获得

一、诱变方法

二、淘汰野生型

三、检出缺陷型

四、营养缺陷型生长谱的确定

实验44芽孢杆菌营养缺陷型生长谱的确定

第三节呼吸缺陷型标记菌种的获得

实验45酵母呼吸缺陷型的筛选

第四节抗反馈调节抗性突变株的获得与应用

实验46氨基酸抗反馈调节突变株的选育

第五章原生质体系列育种技术

第一节工业菌种育种的策略

第二节原生质体融合育种

一、原生质体融合育种的特点

二、原生质体融合育种步骤与要点

三、原生质体再生率和融合率的计算

实验51芽孢杆菌的原生质体融合

实验52链霉菌原生质体融合

实验53小单胞菌的原生质体融合

实验54酿酒酵母的原生质体融合

实验55丝状真菌的原生质体融合

第三节原生质体转化育种

实验56芽孢杆菌原生质体转化

实验57质粒DNA转化链霉菌原生质体

实验58酿酒酵母的原生质体转化法

实验59真菌原生质体转化

第四节原生质体诱变育种

实验510芽孢杆菌种间融合子F262原生质体诱变育种

实验511紫外线诱变原生质体选育L谷氨酸高产菌

第五节原生质体技术中的一些特殊技术

一、紫外线照射原生质体增加融合率

二、供体原生质体的热灭活

三、原生质体电融合技术

实验512电诱导酵母原生质体融合

四、遗传转移

实验513原生质体融合法转移酵母线粒体及杀伤质粒

第六章基因工程育种技术

第一节基因工程的基本过程和原理

一、载体

二、DNA重组用酶

第二节大肠杆菌基因工程

一、大肠杆菌感受态细胞的制备和转化

实验61用氯化钙制备和转化感受态大肠杆菌

实验62用氯化钙制备感受态大肠杆菌

实验63用PEG制备和转化大肠杆菌感受态细胞

实验64大肠杆菌的电击转化

二、大肠杆菌中质粒的提取与纯化

实验65质粒的大量提取与纯化

实验66质粒的小量提取

实验67用硅胶膜分离法小量提取质粒

三、外源基因在大肠杆菌中的高表达

实验68载体和基因的酶切

实验69基因与载体的连接

第三节非大肠杆菌微生物基因工程

一、芽孢杆菌基因工程

实验610枯草杆菌感受态细胞的制备和转化

实验611枯草杆菌染色体DNA的提取

实验612枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）碱性果胶酶基因的PCR扩增

实验613从电泳凝胶中分离枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）碱性果胶酶基因

实验614枯草杆菌转化子质粒的提取和检测

实验615地衣芽孢杆菌感受态细胞的诱导形成及其高效电转化

二、酵母基因工程

实验616酵母染色体DNA的提取

实验617酿酒酵母的乙酸锂完整细胞转化法

实验618单链载体DNA的制备

实验619酵母菌质粒DNA的提取

实验620碱性果胶酶基因重组巴斯德毕赤酵母的构建

实验621羟酸还原异构酶基因多拷贝重组啤酒酵母的构建

第四节其他基因工程育种常用技术

实验622酿酒酵母W303甘油酯酶GPP2基因敲除技术

实验623粗糙脉孢菌漆酶基因的定点突变技术

第五节蛋白质纯化技术

实验624利用His标签进行Ni柱纯化甘油脱氢酶的分离技术

实验625离子交换色谱技术分离纯化蛋白质

第七章微生物细胞固定化方法

第一节载体结合法

一、表面吸附法

二、共价结合法

实验71Amycolatopsis spST2710的载体固定化

第二节交联法

第三节包埋法

一、藻酸钙凝胶包埋法

实验72酿酒酵母的藻酸钙固定化

实验73固定化枯草杆菌连续生产耐热α淀粉酶

二、κ角叉胶包埋法

实验74κ角叉胶一步包埋法

实验75κ角叉胶二步包埋法

实验76固定化酵母连续生产酒精

实验77固定化细胞的回收与活细胞计数

三、聚丙烯酰胺凝胶包埋法

实验78大肠杆菌的聚丙烯酰胺凝胶固定化

四、光交联树脂前聚体包埋法

实验79光交联树脂固定化原生质体

第八章菌种保藏方法与机构

第一节菌种的退化与防治措施

一、菌种退化的现象及原因

二、防止退化措施

第二节常用菌种保藏

一、菌种保藏的原理

二、常用的菌种保藏方法

实验81斜面保藏法

实验82液体石蜡保藏法

实验83载体保藏法

实验84甘油管低温保藏法

实验85液氮冷冻保藏法

实验86真空冷冻干燥保藏法

第三节基因工程菌的保藏

第四节著名菌种保藏及专利菌种保藏机构

一、中国微生物菌种保藏管理委员会组织系统

二、国际著名菌种保藏机构

三、国际确认的专利菌种保藏机构（IDA）

参考文献

《现代发酵微生物实验技术（第二版）》作者所在的发酵工程学科是我国最早授予的国家重点学科之一，参与编写者在教学与科研上都有较为丰富的实践经验和研究成果。
《现代发酵微生物实验技术（第二版）》延续了《现代发酵微生物实验技术》(第一版)编写中“图文并茂，有论述，有操作，有结果”的特色。
《现代发酵微生物实验技术（第二版）》在内容上保留了显微技术、微生物细胞特殊结构的观察、噬菌体、标记菌种获得与应用、原生质体系列育种技术和固定化细胞生物转化等实用技术，并结合本研究室近几年的研究经验，对

本书适合高等院校微生物学、发酵工程、生物工程、食品工程等专业的高年级本科生及研究生阅读使用，也可供相关科研人员参考。