细胞生物学实验技术

第一章　显微镜技术

基本方案1　普通显微镜的构造及使用方法

基本方案2　相差显微镜的构造及使用方法

基本方案3　荧光显微镜的构造及使用方法

基本方案4　透射电子显微镜与超薄切片技术

基本方案5　扫描电子显微镜与样品制备

备择方案1　激光扫描共聚焦显微镜的构造及使用方法

备择方案2　激光捕获显微切割技术

支持方案显微摄影技术

第二章　组织学基本技术

基本方案1　石蜡切片技术

基本方案2　冰冻切片技术

基本方案3　苏木素伊红（hematoxylineosinstain,HE）染色技术

备择方案1　吉姆萨（Giemsa）染色技术

备择方案2　组织学切片的Feulgen染色技术

备择方案3　中性脂肪油红O显示（Oil red O stain）技术

备择方案4　组织切片的碱性磷酸酶染色技术（ALP钙钴法）

备择方案5　组织切片的琥珀酸脱氢酶染色（SDH stain）技术

备择方案6　组织切片的核酸甲苯胺蓝显示技术

第三章　细胞结构与成分的显示技术

基本方案1　细胞中DNA和RNA的显示

基本方案2　细胞中过氧化物酶的显示

基本方案3　细胞中碱性蛋白的显示

基本方案4　一氧化氮合酶的显示

基本方案5　细胞中线粒体的活体染色

基本方案6　细胞中糖类和脂类的显示

基本方案7　酸性磷酸酶的显示

备择方案1　细胞中液泡系的活体染色

备择方案2　培养细胞完整生物膜系统的观察

备择方案3　微丝的染色及形态观察 支持方案间接免疫荧光技术显示胞质微管

第四章　细胞生理实验

基本方案1　细胞的运动

基本方案2　细胞的吞噬活动

基本方案3　细胞自噬检测方法

备择方案细胞膜通透性的测定

第五章　细胞培养和分析

基本方案1　细胞的原代培养

基本方案2　培养细胞的形态观察和计数

基本方案3　培养细胞生长曲线的绘制和分裂指数的测定

基本方案4　细胞集落形成实验

基本方案5　器官培养方法

基本方案6　鸡胚尿囊培养法

备择方案1　细胞的传代培养

备择方案2　MTT对细胞生长状况的检测

备择方案3　表皮细胞的培养

备择方案4　骨骼肌细胞的培养

备择方案5　内皮细胞的培养

备择方案6　神经胶质细胞的培养

备择方案7　骨髓间充质干细胞的培养及其体外诱导分化

支持方案1　细胞的冻存与复苏

支持方案2　细胞显微测量技术

支持方案3　细胞培养中支原体污染的检测

支持方案4　放射自显影术及同位素液闪测定

第六章　干细胞培养及诱导分化

基本方案1　人胚胎干细胞传代培养

基本方案2　人胚胎干细胞的诱导分化

基本方案3　肿瘤干细胞的分离纯化

备择方案诱导多潜能干细胞

支持方案小鼠胚胎成纤维细胞（MEF）

的分离及饲养层的制备

第七章　细胞周期分析

基本方案流式细胞仪检测细胞周期

备择方案1　细胞同步化实验

备择方案2　通过分析CDK的活性检测细胞周期

第八章　细胞成分的分离与分析

基本方案1　差速离心法分离细胞和细胞器

基本方案2　密度梯度离心法分离细胞组分

基本方案3　SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳分离蛋白质

基本方案4　Western印迹技术

备择方案免疫沉淀法

支持方案蛋白质的双向聚丙烯酰胺凝胶电泳

第九章　细胞工程基础技术

基本方案1　细胞融合实验

基本方案2　单克隆抗体的制备

备择方案1　染色体提前凝集标本的制备

备择方案2　显微注射技术（核移植）

备择方案3　DNA转染实验（绿色荧光蛋白）

支持方案体外受精技术

第十章　细胞凋亡的测定

基本方案1　凋亡细胞的普通光镜观察

基本方案2　凋亡细胞的荧光显微镜观察

基本方案3　凋亡细胞的琼脂糖凝胶电泳检测——DNA梯状条带（DNA ladder）

备择方案1　凋亡细胞的电镜观察

备择方案2　凋亡细胞的原位末端标记法检测

备择方案3　凋亡细胞的单细胞电泳检测

备择方案4　凋亡细胞的流式细胞法检测

支持方案磷酸酰丝氨酸外化的流式细胞术分析

第十一章　染色体技术

基本方案1　染色体标本制备

基本方案2　端粒及端粒酶显示技术

备择方案1　染色体显带技术

备择方案2　性染色质的制备

备择方案3　姐妹染色单体交换实验

备择方案4　染色体原位杂交技术

支持方案染色体实验试剂配制

第十二章　分子细胞生物学技术

基本方案1　DNA提取及检测

基本方案2　RNA提取及检测

基本方案3　Southern印迹技术

基本方案4　Northern印迹技术

基本方案5　RNA干扰技术

基本方案6　酵母双杂交技术

备择方案1　RTPCR

备择方案2　原位PCR技术

备择方案3　荧光定量PCR技术

备择方案4　基因芯片技术

备择方案5　原位缺口平移技术

备择方案6　染色质免疫沉淀法

备择方案7　昆虫杆状病毒表达系统

备择方案8　GST pulldown分析

参考文献

为了跟上学科的发展，适应发展的需要，作者对《细胞生物学实验技术》进行修订更新，推出第二版，新版适合大多数院校（普通高等学校及医药院校）研究生与本科生学习细胞生物学技术的需要。特点在于：

　　基础训练为主，同时增加最新而又不难掌握与了解的技术。本版中除了保留原有大部分内容之外，根据反馈意见增加了作为生物学与医学研究最基本手段的组织学切片技术，也不失时宜地补充了多种干细胞培养的培养方法、鉴定及运用，其中包括诱导多潜能干细胞（iPScells）和肿瘤干细胞培养、细胞自噬、端粒与端粒酶显示技术、酵母双杂交技术、昆虫杆状病毒表达系统等。

　　本版也尝试采用如同《精编细胞生物学实验指南》（ShodProtocols in CellBiology，edJS Bonifacino，et al，byJohnWiley&Sonslnc．）那样将所介绍的方法分为基本方案、备择方案和支持方案3类。基本方案是指总体推荐或是最普遍应用的方法，也是使用者应力求掌握的方法。备择方案乃针对采用不同设备和试剂而达到相同结果时可选用者，或许可以认为它是基本方案的一种补充与佐证。支持方案所描述的是进行基本方案或备择方案所需要的那些附加步骤，这些步骤独立于核心方案，它们或许也可以在其他实验中用到。

　　《细胞生物学实验技术（第2版）》可以作为相关高等院校的本科教材，也可供从事细胞生物学研究工作的人员阅读参考。