医学分子生物学实验技术

绪论

一、分子生物学技术的历史和意义

二、医学分子生物学实验设计思路

三、分子生物学实验实施

第一章 聚合酶链反应

第一节 PCR技术概述

一、PCR技术的建立和基本原理

二、PCR的反应体系

三、PCR反应基本步骤

第一节PCR的引物设计和条件优化

一、PCR引物的设计

二、PCR反应条件的优化

第三节 PCR产物的鉴定方法

第四节 PCR的基本类型及应用

一、PCR技术的主要类型

二、PCR技术的用途

第五节 实时定量PCR

一、实时定量PCR技术的原理

二、应用于实时定量PCR中的荧光探针与荧光染料

三、实时定量PCR的实验流程

四、实时定量PCR常见问题及优化方案

五、实时定量PCR技术在医学上的应用

第二章 DNA体外重组

第一节 DNA体外重组的基本流程

一、基本流程

二、关键工具酶

第二节 载体的选择及准备

一、载体及其基本特性

二、载体图谱

三、载体的选择

第三节 目的DNA片段的获取

一、获取DNA片段的方法选择

二、DNA片段末端的处理

第四节 DNA片段与载体的连接

一、DNA片段与载体的连接方式

二、连接反应时需要考虑的一些因素

三、平端连接条件的优化

第五节 重组DNA转化宿主细胞

一、宿主细胞的选择

二、大肠埃希菌感受态制备

三、重组DNA分子转化大肠埃希菌

第六节 重组DNA的克隆筛选及鉴定

第三章 DNA序列分析技术

第一节 常规DNA序列测定的原理

一、双脱氧测序法的原理

二、Maxam-Gilbert化学降解法测序原理

三、常规DNA测序的用途

第二节 自动激光荧光DNA测序——第一代测序技术

一、自动激光荧光DNA测序基本原理

二、自动激光荧光DNA测序程序

三、自动激光荧光DNA测序注意事项

第三节 其他DNA序列分析新技术

一、焦磷酸测序法

二、第二代测序技术——循环芯片测序法

三、第三代测序技术——单分子测序技术

第四章 基因突变技术

第一节 体外基因突变和鉴定

一、体外基因突变的原理和应用

二、体外基因突变的策略和步骤

第二节 细胞和动物的基因诱变和鉴定

一、利用ENU进行大规模基因诱变

二、利用转座子进行大规模基因诱变

第五章 核酸分子杂交

第一节 核酸探针及其标记

一、探针的种类及其选择

二、核酸标记物及其选择

三、核酸探针的标记方法

四、标记探针的纯化

第二节 SolJthem印迹杂交

一、固相支持物与印迹方法的选择

二、SotRhern印迹杂交基本过程

……

第六章 外源基因在原核细胞的表达

第七章 外源基因在真核细胞中的表达

第八章 蛋白质的分离纯化

第九章 蛋白质的定性定量分析

第十章 蛋白的化学修饰分析

第十一章 蛋白质的空间结构分析

第十二章 蛋白质相互作用研究技术

第十三章 蛋白质组学研究相关技术

第十四章 基因表达谱分析

第十五章 基因转录调控分析

第十六章 非编码RNA研究策略与方法

《医学分子生物学实验技术(第2版)(供临应床医学等专业用)》是卫生部“十二五”规划教材,全国高等医药教材建设研究会“十二五”规划教材,全国高等学校医学研究生规划教材之一。《医学分子生物学实验技术(第2版)(供临应床医学等专业用)》讲述了：分子生物学是生命科学发展中最重要的前沿领域，也是许多相关学科的理论和技术基础，其在医学研究中的重要性更是无论怎样强调也不过分。以重组DNA技术为中心内容的分子生物学方法学在20世纪80年代初结束了创始阶段，实现了在全世界的普及，并且在多方面不断有新的进展，手段日新月异。随着人类基因组计划的完成，分子生物学技术在医学领域中的应用越来越一泛。因此，分子生物学理论和分子生物学技术在医学院校的研究生教学中的重要性日益凸显。加强基础医学和临床医学专业研究生的分子生物学实验技术教学，将极大地促进在研究课题中充分利用先进的分子生物学技术手段以更好地解决医学问题。