旋变成单链的过程,这个过程需要解旋酶。(2)A为目的基因,B为运载体,用同一种限制性内切酶切割,使它们产生相同的末端,然后在DNA连接酶的作用下连接在一起形成重组DNA。(3)从大肠杆菌中提取的B为质粒,在基因工程中可以起运载体的作用,运载体必须具备的条件是具有标记基因、具有目的基因插入位点和能够在寄主细胞中复制并稳定保存。(4)基因工程中常用的受体细胞是大肠杆菌、枯草杆菌、酵母菌和动植物细胞等。

答案:(1)反转录酶、DNA聚合酶　解旋酶

　　(2)同一种限制性内切酶　末端　DNA连接酶

　　(3)运载体　具有标记基因、具有目的基因插入位点和能够在寄主细胞中复制并稳定保存

　　(4)受体　大肠杆菌、枯草杆菌、酵母菌和动植物细胞

三、综合应用

11.根据基因工程的有关知识,回答下列问题。

(1)限制性内切酶切割DNA分子后产生的片段,其末端类型有　　　　　和　　　　　。

(2)质粒运载体用EcoRⅠ切割后产生的片段如下:

AATTC......G

G......CTTAA

为使运载体与目的基因相连,含有目的基因的DNA除可用EcoRⅠ切割外,还可用另一种限制性内切酶切割,该酶必须具有的特点是 　。

(3)反转录作用的模板是　　　　　　　,产物是　　　　　　　　。若要在体外获得大量反转录产物,常采用　　　　　　　技术。

(4)基因工程中除质粒外,　　　　　　　　和　　　　　　　　　　也可作为运载体。

(5)若用重组质粒转化大肠杆菌,一般情况下,不能直接用未处理的大肠杆菌作为受体细胞,原因是　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　。

解析:(1)限制性内切酶切割DNA分子后,露出的末端类型有黏性末端和平末端两种。(2)要想用另一种限制性内切酶切割目的基因并与题中质粒运载体相连接,则该限制性内切酶切割后的末端应与EcoRⅠ切割后的末端相同或互补。(3)反转录的模板是RNA,产物是cDNA(或DNA),可用PCR技术对其扩增。(4)基因工程中常用的运载体有质粒、噬菌体、动植物病毒。(5)不经特殊处理,大肠杆菌吸收质粒DNA的能力很弱。

答案:(1)黏性末端　平末端

　　(2)切割产生的DNA片段的末端与EcoRⅠ切割产生的末端相同或互补

　　(3)mRNA(或RNA)　cDNA(或DNA)　PCR

　　(4)噬菌体　动植物病毒

　　(5)未处理的大肠杆菌吸收质粒(外源DNA)的能力极弱

12.下图表示基因工程的主要操作步骤,请据图回答问题。