需要DNA聚合酶,选项A错误;CaCl2处理只是提高农杆菌细胞的细胞壁的通透性,选项B错误;抗植物病毒基因整合到番茄细胞的染色体上,不一定能表达,选项C错误;转基因抗植物病毒番茄是否培育成功可通过接种特定病毒,观察番茄是否被感染的实验进行鉴定,选项D正确。
6.(2016·高考全国卷Ⅲ)图(a)中的三个DNA片段上依次表示出了EcoR Ⅰ、BamH Ⅰ和Sau3A Ⅰ三种限制性内切酶的识别序列与切割位点,图(b)为某种表达载体的示意图(载体上的EcoR Ⅰ、Sau3A Ⅰ的切点是唯一的)。
根据基因工程的有关知识,回答下列问题:
(1)经BamH Ⅰ酶切后得到的目的基因可以与上述表达载体被____________酶切后的产物连接,理由是____________。
(2)若某人利用图(b)所示的表达载体获得了甲、乙、丙三种含有目的基因的重组子,如图(c)所示。这三种重组子中,不能在宿主细胞中表达目的基因产物的有____________,不能表达的原因是_______________________________________________________。
(3)DNA连接酶是将两个DNA片段连接起来的酶,常见的有_________和__________,其中既能连接黏性末端又能连接平末端的是____________。
解析:(1)由图(a)可知,尽管BamH Ⅰ和Sau3A Ⅰ两种限制酶的识别位点不相同,但两种酶切割后产生的DNA片段具有相同的黏性末端,故被BamH Ⅰ酶切后得到的目的基因可以与图(b)中表达载体被Sau3A Ⅰ酶切后的产物连接。(2)运载体上的启动子和终止子具有调控目的基因表达的作用,由于甲和丙的目的基因分别插入在启动子的上游和终止子的下游,故这两个运载体上的目的基因都不能被转录和翻译。(3)常见的DNA连接酶是E·coli DNA连接酶和T4DNA连接酶,但作用有所差别,T4DNA连接酶既能连接黏性末端,又能连接平末端,而E·coli DNA连接酶只能连接黏性末端。
答案(1)Sau3A Ⅰ 两种酶切割后产生的片段具有相同的黏性末端
(2)甲和丙 甲中目的基因插入在启动子的上游,丙中目的基因插入在终止子的下游