12．【生物--选修3：现代生物科技专题】

　　科研人员通过基因工程实现了β-甘露聚糖酶基因在猪肠道野生酵母菌中的表达，使原来不能被猪利用的粗纤维在猪肠道内被分解成了可直接吸收的单糖。下图为构建工程菌的部分过程，其中介导序列能引导载体整合到酵母菌的染色体DNA上。请回答。

　　（1）①过程中需要的工具酶是___________ ，②、③过程中需要的工具酶是___________。

　　（2）同尾酶是指切割DNA分子后能产生相同黏性末端的限制酶，图中4种限制酶中属于同尾酶的是___________。

　　（3）重组表达载体中的介导序列引导目的基因整合到酵母菌的染色体DNA上，其意义在于___________ 。

　　（4）①过程从野生酵母菌染色体DNA中PCR扩增介导序列时，科研人员设计了如下一对引物: GACCTCAAATCAGGTAGG 和 TTGCATTGACTTACA，其中下划线部分序列的设计依据是___________ ，方框部分序列的设计目的是___________________

。

　　（5）对重组表达载体进行酶切鉴定，假设所用的酶均可将识别位点完全切开。若使用 EcoRⅠ和SaⅠ酶切，可得到____________种DNA片段。若使用EcoRⅠ和BamHⅠ酶切，可得到____________种DNA片段。