A.仍与引物Ⅰ结合进行DNA子链的延伸

B.与引物Ⅱ结合进行DNA子链的延伸

C.同时与引物Ⅰ和引物Ⅱ结合进行子链的延伸

D.无需与引物结合,在酶的作用下从头合成子链

解析:考查对PCR反应中的变性、复性、延伸的实质是否理解。当由引物Ⅰ延伸而成的DNA单链作模板时,此单链引物固定端为5'端,因此与它互补的子链应从另一端开始合成,即与引物Ⅱ结合延伸DNA子链。

答案:B

6.PCR实验中使用的微量离心管、缓冲溶液以及蒸馏水在使用前必须进行的关键步骤是(　　)

A.反复洗涤 B.用酒精擦洗

C.高压灭菌 D.在-20 ℃储存

解析:在PCR实验中要严防外源DNA污染,要对使用的各种仪器、药品严格消毒灭菌,操作要迅速,注意无菌操作。

答案:C

7.在PCR扩增前,需要将下列哪些物质加入微量离心管中?(　　)

①模板DNA　②模板RNA　③DNA解旋酶　④耐高温的DNA聚合酶　⑤引物　⑥PCR缓冲液　⑦脱氧核苷酸贮备液　⑧核苷酸贮备液

A.①④⑤⑥⑦ B.①③④⑤⑥⑧

C.②③④⑤⑥⑦ D.①④⑥⑦⑧

解析:DNA的复制需要模板、原料、能量和酶,在外界扩增DNA时不需要加入解旋酶,因高温能使氢键断裂,但需要加入模拟细胞环境的缓冲液,故需要加入的是①④⑤⑥⑦,A项正确。

答案:A

8.PCR操作中,从第二轮循环开始扩增的DNA片段(　　)

A.长度固定 B.一端固定

C.都不固定 D.不能确定

解析:PCR扩增产物可分为长产物片段和短产物片段两部分。短产物片段的长度严格地限制在两个引物链5'端之间,是需要扩增的特定片段。进入第二轮循环后,引物除与原始模板结合外,还要同新合成的链(即"长产物片段")结合,引物在与新链结合时,由于新链模板的5'端序列是固定的,这就等于这次延伸的片段3'端被固定了终点,保证了新片段的起点和终点都限定于引物扩增序列以内,形成长短一致的"短产物片段"。

答案:A

9.使用PCR仪的具体实验操作顺序应为(　　)

①设计好PCR仪的循环程序　②按配方准备好各组分

③用微量移液器在微量离心管中依次加入各组分　④进行PCR反应　⑤离心使反应液集中在离心管底部

A.②③⑤④① B.①⑤③④②

C.②③⑤①④ D.④②⑤③①

解析:使用PCR仪进行DNA扩增前,首先按照PCR体系配方,依次将各组分加入微量离心管离心,使反应液集中于试管底部,然后再设计好PCR仪的循环程序进行PCR反应。

答案:C

10.下列关于PCR技术的叙述,不正确的是(　　)

A.PCR技术是在实验室中以少量DNA制备大量DNA的技术

B.反应中新合成的DNA又可以作为下一轮反应的模板

C.PCR技术中以核糖核苷酸为原料,以指数方式扩增

D.应用PCR技术与探针杂交技术可以检测基因突变

解析:PCR技术就是体外大量扩增DNA的技术,即以少量DNA制备大量DNA的技术,A项正确。PCR技术的原理就是DNA复制,反应中新合成的DNA又可以作为下一轮反应的模板,所需原料是脱氧核苷酸,并以指数方式扩增,B项正确,C项错误。应用PCR技术与探针杂交技术可以检测基因突变,D项正确。