解析：选C。A选项中的DNA用KpnⅠ单独酶切会得到600 bp和200 bp两种长度的DNA分子，与题意不符，A错误；B选项中的DNA用KpnⅠ单独酶切会得到600 bp和400 bp两种长度的DNA分子，与题意不符，B错误；C选项中的DNA用KpnⅠ单独酶切后得到的DNA分子长度是1 000 bp，用EcoR Ⅰ单独酶切会得到200 bp和800 bp两种长度的DNA分子，用EcoRⅠ、KpnⅠ同时酶切后会得到200 bp和400 bp两种长度的DNA分子，与题意相符，C正确；D选项中的DNA用KpnⅠ单独酶切后得到400 bp和600 bp两种长度的DNA分子，与题意不符，D错误。

　　4．(2018·北京海淀区高二练习)如图是基因工程主要技术环节的一个基本步骤，这一步骤需用到的工具酶是(　　)

　　A．DNA连接酶和解旋酶

　　B．DNA聚合酶和限制性核酸内切酶

　　C．限制性核酸内切酶和DNA连接酶

　　D．DNA聚合酶和RNA聚合酶

　　解析：选C。目的基因和载体结合需"分子手术刀"--限制性核酸内切酶和"分子缝合针"--DNA连接酶。此过程不涉及DNA复制，不需要DNA聚合酶和解旋酶。

5．(2018·江苏扬州中学质量检测)基因工程利用某目的基因(图甲)和P1噬菌体载体(图乙)构建重组DNA。限制性核酸内切酶BglⅡ、EcoRⅠ和Sau3AⅠ的酶切位点分别如图所示。下列分析错误的是(　　)