课题2　多聚酶链式反应扩增DNA片段

　　学习目标：1.理解PCR的原理。(重点)　2.体验PCR这一常规的分子生物学实验的方法。(难点)　3.了解PCR的应用。(重点)

　　1．PCR扩增的原理和过程

　　(1)细胞内DNA复制过程的解析

解旋：在解旋酶作用下，DNA两条链打开，形成两条DNA单链

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引物结合：在DNA单链3′端，通过碱基互补配对与DNA母链结合

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DNA聚合酶结合：DNA聚合酶与模板链结合，标志着单链合成 开始

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子链合成：DNA聚合酶从引物3′端开始，将配对的脱氧核苷酸连接起来

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后续加工：将引物切去，并合成空缺处的DNA单链，再由DNA连接酶将不连续的DNA子链连接起来，子链和母链再形成双螺旋结构

　　(2)PCR技术的原理

　　①PCR技术：即多聚酶链式反应，是一种体外迅速扩增DNA片段的技术。它能以极少量的DNA为模板，在几小时内复制出上百万份的DNA拷贝。

　　②子链扩增：需要引物，合成方向总是从子链的5′端向3′端延伸。

　　③解旋原理：DNA的热变性原理。在80～100_℃的温度范围内，DNA的双螺旋结构将解体，双链分开，这个过程称为变性。当温度缓慢降低后，两条彼此分离的DNA链又会重新结合成双链。

　　④条件

　　ⅰ模板：DNA的两条链。

ⅱ引物：分别与模板DNA两条模板链相结合的两种小的核酸片段。