互动课堂

　　疏导引导

　　1.基因工程的含义

　　（1）它是一种按照人们的意愿，定向改造生物遗传特性的技术。

　　（2）在DNA分子水平进行操作。

　　（3）是在体外进行的人为基因重组。

　　（4）一旦成功，便可遗传。

　　（5）主要技术为体外DNA重组技术和转基因技术。

　　2.限制性核酸内切酶

　　在生物体内有一类酶，它们能将外来的DNA切断，即能够限制异源DNA的侵入并使之失去活力，但对自己的DNA却无损害作用，这样可以保护细胞原有的遗传信息。由于这种切割作用是在DNA分子内部进行的，故名限制性核酸内切酶（简称限制酶）。限制酶是基因工程中所用的重要切割工具。科学家已从原核生物中分离出了许多种限制酶，并且已经商品化，在基因工程中广泛使用。

　　根据限制酶切割的特点，可将它们分为两大类：一类是切割部位无特异性；另一类是可特异性地识别核苷酸序列，即只能在一定的DNA序列上进行切割。这种能被特异性识别的切割部位都具有回文序列，也就是在切割部位，一条链正向读的碱基顺序，与另一条链反向读的顺序完全一致。在基因工程中使用的多数是后一类酶。限制酶在特定切割部位进行切割时，按照切割的方式，又可以分为错位切和平切两种。错位切一般是在两条链的不同部位切割，中间相隔几个核苷酸，切下后的两端形成一处回文式的单链末端，这种酶在基因工程中应用最多。另一种是在两条链的特定序列的相同部位切割，形成一无黏性末端的平口。

　　在基因操作过程中，除了限制酶以外，还要用一系列的酶类才能完成全过程。例如，碱性磷酸酯酶、DNA多聚酶、末端转移酶、多核苷酸酶、逆转录酶等。这些酶都有各自特殊的催化功能，可以根据不同的需要选用。

　　3.载体的必备条件

　　（1）必须有一个或多个限制酶的切割位点，以便目的基因可以插入到载体上。

　　（2）载体必须具备自我复制的能力，或整合到受体染色体DNA上随染色体DNA的复制而同步复制。

　　（3）必须带有标记基因，以便进行重组后的筛选。

（4）必须是安全的，不会对受体细胞有害，或不能进入到除受体细胞外的其他生物细