第15课时　血红蛋白的提取和分离

学习目标　1.掌握蛋白质分离的方法--凝胶色谱法的原理、缓冲液的制备及作用和蛋白质纯度鉴定的方法--电泳法的原理。2.掌握蛋白质提取和分离的过程。3.掌握蛋白质分离过程中需注意的问题。

一、蛋白质的分离技术

1．蛋白质的分离依据

根据蛋白质各种特性的差异，如分子的形状和大小、所带电荷的性质和多少、溶解度、吸附性质和对其他分子的亲和力等，可以用来分离不同种类的蛋白质。

2．凝胶色谱法

(1)概念：也称做分配色谱法，是根据相对分子质量的大小分离蛋白质的有效方法。

(2)凝胶的特点

(3)常用凝胶：葡聚糖或琼脂糖。

(4)分离原理

①相对分子质量较小的蛋白质容易进入凝胶内部的通道，路程较长，移动速度较慢，通过凝胶的时间较长。

②相对分子质量较大的蛋白质无法进入凝胶内部的通道，只能在凝胶外部移动，路程较短，移动速度较快，通过凝胶的时间较短。

特别提醒　洗脱是指从色谱柱上端不断注入缓冲液，促使蛋白质分子的差速流动。

3．缓冲溶液

(1)作用：在一定范围内，缓冲溶液能够抵制外界的酸和碱对溶液pH的影响，维持pH基本不变。

(2)配制：通常由1～2种缓冲剂溶解于水中配制而成。调节缓冲剂的使用比例就可以制得在不同pH范围内使用的缓冲液。

(3)意义：为了能够在实验室条件下准确模拟生物体内的过程，就必须保持体外溶液的pH与体内环境中的pH基本一致。

4．电泳

(1)概念：带电粒子在电场的作用下发生迁移的过程。

(2)原理

①带电粒子：许多重要的生物大分子，如多肽、核酸等都具有可解离的基团，在一定的p