第一节 蛋白质的提取和分离

[课标要求]

　　 尝试蛋白质的提取和分离

[知识梳理]

一．背景知识

1．常用的蛋白质分离提纯技术有 和 等。其中 技术最为快捷灵敏，简便易行。

2．电泳现象： 。

3．电泳技术分离蛋白质的原理：

　　 。

4．聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）： 。

二．实践案例--血清蛋白的提取和分离

1．材料用具（略）

2．活动程序

　　（1）点样： 新配制血清5μL，与 质 量 浓 度 为0.4g/mL的 蔗 糖 溶 液 及 质 量 分 数为 的 指示剂等体积混匀后，用 加样器吸取5μL样品，小心加到电泳样品槽的胶面上。

　　（2）．电泳：打开稳压稳流电泳仪的电源，将电流调节至 mA，待样品进入分离胶后，改为 mA,当溴酚蓝前沿距离硅胶框下缘 时，将电流调回零。关闭电源。

　　（3）．染色：取出凝胶，放入质量分数为 的 中，染色与 同时进行，使染色液没过胶板，染色 。

　　（4）．脱色：用体积分数为 的 浸泡漂洗数次，每隔 更换脱色液，直至底色脱净，背景清晰。

　　（5）．烘干胶板：将已脱色的凝胶板放在保存液中浸泡 然后将凝胶板放在两层透气玻璃纸中间，自然干燥即可获得血清蛋白的电泳谱带。

　　3．结果分析

　　（1）分析没有出现电泳谱带的原因

　　（2）通过辨认电泳谱带可初步判断血清中蛋白质的种类

　　三．探究活动

　　1．牛奶中酪蛋白的提取和检测

　　提取原理：当pH= 时，酪蛋白的溶解度降低，并析出沉淀。用 除去酪蛋白中的脂肪后，即得到纯的酪蛋白。

　　检测原理：酪蛋白中的酪氨酸，能与 起颜色反应，首先生成白色沉淀，加热后变成 。

　　2．卵清蛋白的分离

　　用聚丙烯酰胺凝胶电泳技术分离（同上）

　　四．意义

　　1．胰岛素的提纯

　　2．对细胞癌变做出诊断

　　[复习指导]

本节课复习以聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）为例，以电泳技术分离蛋白质的原理为基础