第2课时　分离以尿素为氮源的微生物

考试要求

知识内容 考试属性及要求 考情解读 分离以尿素为

氮源的微生物 加试 1.进行微生物分离。使用含有尿素的培养基，采用涂布分离法，分离有脲酶的细菌。

2.使用酚红指示剂检测以尿素为氮源的细菌的存在。

3.说明分离以尿素为氮源的细菌的实验原理。

4.举例说明本实验分离出来的细菌不一定都是以尿素为氮源的细菌。

一、实验目的、原理、设备、用品及材料准备

1.实验目的

(1)使用专一的培养基(含有尿素)分离专一的细菌(有脲酶的细菌)。

(2)利用指示剂颜色的变化检知酶(脲酶)所催化的反应。

2.实验原理

(1)脲或称尿素，是蛋白质降解的产物。有一些细菌含有脲酶可以分解尿素，利用尿素作为其生长的氮源。

(2)(NH2)2C＝O＋H2O\s\up7(脲酶(脲酶)2NH3＋CO2

3.设备及用品

灭菌锅或高压锅、250 mL的三角瓶1个和100 mL的三角瓶2个、封口膜和橡皮圈、培养皿4个、接种环和玻璃刮刀、恒温培养箱、摇床、酒精灯和超净台、一次性塑料手套、装有酒精棉球的广口瓶、镊子、有盖的试管(15 mm×150 mm)5支和试管架、移液器。

4.实验材料

(1)在100 mL烧杯中装入50 mL 70%酒精，将玻璃刮刀浸泡在其中。

(2)在100 mL三角瓶中配制好25 mL全营养LB固体培养基(0.25 g蛋白胨，0.12 g酵母提取物，0.25 g NaCl和0.5 g琼脂糖，水25 mL)，加上封口膜后灭菌待用。

(3)在100 mL三角瓶中配制好25 mL尿素固体培养基(0.025 g葡萄糖，0.12 g NaCl,0.12 g K2HPO4,0.25 mg酚红和0.5 g琼脂糖，水15 mL)，加上封口膜后灭菌，待冷却至60 ℃时，加入通过G6玻璃漏斗过滤(使之无菌)的10 mL尿素溶液(内含2 g脲)，摇动，混合均匀后待用。