课题3　血红蛋白的提取和分离

　　1．掌握提取生物大分子的基本过程和方法。(重点)　2.理解凝胶色谱法、电泳法等分离生物大分子的基本原理。(重、难点)

　　3．尝试对血液中的血红蛋白进行提取和分离。

　　知识点一　基础知识

　　1．分离原理

　　依据蛋白质各种特性的差异分离蛋白质，如分子的形状和大小、所带电荷的性质和多少、溶解度、吸附性质和对其他分子的亲和力等。

　　2．凝胶色谱法

　　(1)概念：也称为分配色谱法，是根据相对分子质量的大小分离蛋白质的有效方法。

　　(2)凝胶：微小的多孔球体，大多数由多糖类化合物构成，内部有许多贯穿的通道。

　　(3)原理

蛋白质类型 能否进入凝胶内部 移动路程 移动速度 相对分子

质量较小 能 较长 较慢 相对分子

质量较大 不能 较短 较快 　　3.缓冲溶液

　　(1)作用：在一定范围内，抑制外界的酸和碱对溶液pH的影响，维持pH基本不变。

　　(2)配制：由1～2种缓冲剂溶解于水中配制而成，通过调节缓冲剂的使用比例就可以得到不同pH范围内使用的缓冲液。

　　4．电泳

　　(1)概念：指带电粒子在电场的作用下发生迁移的过程。

　　(2)原理：①许多重要的生物大分子，如多肽、核酸等都具有可解离的基团，在一定的pH下，这些基团会带上正电或负电。

　　②在电场的作用下，这些带电分子会向着与其所带电荷相反的电极移动。

　　③电泳利用了待分离样品中各种分子带电性质的差异以及分子本身的大小、形状的不同，使带电分子产生不同的迁移速度，从而实现样品中各种分子的分离。

④方法：常用的电泳方法有琼脂糖凝胶电泳和聚丙烯酰胺凝胶电泳。