第2课时　提取和鉴定DNA

　　一、实验原理

　　1．析出原理

　　(1)DNA能溶解在NaCl溶液中，且溶解度随着NaCl浓度的变化而改变。

　　(2)在NaCl的物质的量浓度为0.14 mol/L时，DNA的溶解度最低。(如下图)

　　2．DNA提纯原理：DNA不溶于乙醇溶液，而细胞中的某些物质能溶于乙醇溶液。

　　3．鉴定原理：DNA遇二苯胺在沸水浴加热的条件下呈蓝色。

　　二、实验器材与试剂

　　1．实验材料：鸡血细胞。(以鸡血为例)

　　2．试剂与仪器：2 mol/L的NaCl溶液、二苯胺试剂、蒸馏水、烧杯、试管、玻璃棒、纱布、体积分数为95%冷却的乙醇溶液、酒精灯、三脚架、石棉网等。

　　三、实验方法与步骤

　　1．制备鸡血细胞液

　　(1)先配备10%的柠檬酸钠溶液，按180 mL新鲜鸡血混合100 mL 10%柠檬酸钠溶液的比例，立即将血液与柠檬酸钠充分混合，同时用玻璃棒搅拌以免凝血。

　　(2)将充分混合的鸡血细胞液置于4 ℃冰箱内，静置一天，使血细胞自行沉淀后获得鸡血细胞液。

　　2．粗提取鸡血的DNA

　　(1)获取核物质：取5～10 mL鸡血细胞液注入50 mL烧杯中，加蒸馏水20 mL，用玻璃棒搅拌5 min，使血细胞过度吸水破裂，细胞核内物质释放出来，然后用纱布过滤取其滤液。

　　(2)溶解DNA：取浓度为2_mol/L的NaCl溶液40 mL加入滤液中，用玻璃棒沿同一方向轻轻搅拌，使其混合均匀。

　　(3)析出DNA丝状物：沿烧杯内壁缓慢加入蒸馏水，同时用玻璃棒沿一个方向轻轻搅拌。由于NaCl溶液浓度的下降，使得DNA溶解度下降，蛋白质溶解度上升，DNA析出成白色丝状物，当丝状物不再增加时，停止加入蒸馏水。

(4)滤取DNA丝状物：用多层纱布过滤，取纱布上 DNA的丝状物。