课题2　多聚酶链式反应扩增DNA片段

　　1．说明PCR的原理。(重、难点)　2.说出PCR技术的基本操作。(重点)

　　3．说出PCR技术的应用。

　　知识点一　PCR扩增的原理及条件

　　1．PCR的概念：PCR即多聚酶链式反应，是一种体外迅速扩增DNA片段的技术。它能以极少量的DNA为模板，在几个小时内复制出上百万份的DNA拷贝。

　　2．细胞内DNA复制的基本条件

参与的组分 在DNA复制中的作用 解旋酶 打开DNA双链 DNA母链 提供DNA复制的模板 4种脱氧核苷酸 合成子链的原料 DNA聚合酶 催化合成DNA子链 引物 使DNA聚合酶能够从引物的3′端开始连接脱氧核苷酸 　　3.PCR原理

　　(1)DNA变性：在80～100_℃的温度范围内，DNA的双螺旋结构将解体，双链分开。

　　(2)DNA复性：当温度缓慢降低后，两条彼此分离的DNA链又会重新结合成双链。

　　(3)子链的合成：DNA聚合酶从引物的3′端开始延伸DNA链，DNA的合成方向总是从子链的5′端向3′端延伸。

　　4．PCR条件

　　(1)原料：4种脱氧核苷酸。

　　(2)模板：加热变性解旋后的两条DNA母链。

　　(3)酶：耐热的DNA聚合酶。

　　(4)引物：使DNA聚合酶能够从引物的3′端开始连接脱氧核苷酸。

　　(5)其他条件：需要稳定的缓冲溶液和能自动调节温度的温控设备等。

　　体内DNA复制与PCR扩增的比较