课题2 多聚酶链式反应扩增DNA片段

学习目标：

　　1、了解PCR技术的基本操作

　　2、理解PCR的原理

　　3、讨论PCR的应用

重点：PCR的原理和PCR的基本操作

难点：PCR的原理

Ⅰ．基础知识

PCR技术扩增DNA的过程，与细胞内DNA复制过程类似：

1．细胞内DNA复制条件分析：

条件 组分 作用 模板 DNA的两条单链 提供复制的模板 原料 四种脱氧核苷酸 合成DNA子链的原料 酶 解旋酶

DNA聚合酶 打开DNA双螺旋

催化合成DNA子链 能量 ATP 为解螺旋和合成子链供能 引物 RNA 为DNA聚合酶提供合成的3'端起点 2．细胞内DNA复制过程的解析：

解 旋：解旋酶、ATP，DNA两条链打开，形成两条DNA单链。

引物结合：在DNA单链3'端与DNA反向配对结合。

DNA聚合酶结合：DNA聚合酶与模板链结合，标志着单链合成开始。

子链合成：DNA聚合酶从引物3'端开始，将配对的脱氧核苷酸连接起来。

后续加工：DNA聚合酶I将引物切去，并合成空缺处的DNA单链，再由DNA连接酶将不连续的DNA子链连接起来（半不连续合成。先导链，滞后链）

子链合成特点： 。

［思考］DNA分子能准确复制的原因有哪些？

。

3． DNA分子复制的人工控制

解开螺旋：在 ℃时，DNA双螺旋打开，形成两条DNA单链，称为变性。