1.2　基因工程的基本操作程序

　　学习目标：1.掌握目的基因获取的常见方法。(难点)　2.学会基因表达载体构建的方法和要求。(重点)　3.理解目的基因导入受体细胞的方法。(重点)　4.掌握目的基因检测与鉴定的具体操作。(重、难点)

　　一、目的基因的获取

　　1．目的基因

　　(1)主要是指编码蛋白质的基因。

　　(2)一些具有调控作用的因子。

　　2．获取方法

　　(1)从基因文库中获取

　　①基因组文库：含有一种生物所有的基因。

　　②部分基因文库：含有一种生物的一部分基因，如cDNA文库。

　　(2)利用PCR技术扩增目的基因

　　①含义：是一项在生物体外复制特定DNA片段的核酸合成技术。

　　②原理：DNA双链复制。

　　③条件：引物、DNA模板、Taq酶、四种脱氧核苷酸。

　　④过程。

　　a．目的基因DNA受热变性后解链为单链(90～95 ℃)。

　　b．引物与单链相应互补序列结合(55～60 ℃)。

　　c．在DNA聚合酶作用下进行延伸(70～75 ℃)。

　　d．重复循环多次。

　　⑤结果：每次循环后目的基因的量增加一倍，即成指数形式扩增(约为2n)。

　　(3)人工合成法

　　①条件：基因比较小，核苷酸序列已知。

②方法：通过DNA合成仪用化学方法直接人工合成。