第二节 DNA片段的扩增--PCR技术

[课标要求]

　　1．理解PCR的原理，讨论PCR应用。

　　2．尝试PCR技术的基本操作。

[知识梳理]

　　一．背景知识

　　1． 细胞内DNA复制步骤：

　　（1）在 作用下解开DNA双链

(2 ) 在 作用下，以DNA单链为模板，合成一段 ;（两条DNA模板链各需一个RNA引物）

(3 ) 以RNA引物为起点，在 作用下，以 为原料，按照碱基互补配对原则合成两条新链。

　　2． 聚合酶链式反应(PCR)概念;

。

　　3． PCR过程与细胞内DNA复制过程区别：

　　（1）引物是人工合成的 单链，２０－３０个脱氧核苷酸，而不是RNA。

(2) 解旋通过对反应 的控制来实现而不依靠 。

　　4．PCR过程：

(1) 将PCR缓冲液、 、一对引物、四种 、DNA聚合酶、Mg2+等成分加入到特制的微量离心管中。

(2) 高温变性：

。

(3) 低温复性：

。

(4) 中温延伸：

。

二． 实践案例

　　1．PCR实验虽然原理复杂，但操作十分简单，因为生物制剂公司已把PCR缓冲液、DNA聚合酶、脱氧核苷酸贮备液等组分配成了PCR试剂盒，实验人员仅需加入模板DNA及引物即可，所以快速、高效、灵活和易于操作是PCR技术的突出优点。

　　2．材料用具 略

　　3．活动程序

(1) 加入各种试剂，混合，离心10s，放入PCR仪中。

　　 (2) 扩增循环，在PCR仪上设置好PCR热循环程序：

循环数 高温变性 低温复性 中温延伸 第一次 95℃,5min 55℃,1min 72℃,1min 30次 95℃,30s 55℃,30s 72℃,1min