① 能在受体细胞中复制并稳定保存；

　　② 具有一至多个限制酶切割位点，供外源DNA片段插入；

　　③ 具有标记基因，供重组 DNA的鉴定和选择；

　　④ 对受体细胞无害，不会影响受体细胞正常的生命活动。

（2）常用运载体--质粒：裸露的，结构简单且独立于细菌DNA之外的，具有自我复制能力的小型环状DNA分子。

(二) 基因工程的基本操作程序

　1．目的基因的获取：

　　① 直接从生物体中提取总DNA，构建基因组DNA文库，从中调用目的基因；

　　② 以mRNA为模板，反转录合成互补的DNA片段，建立cDNA文库；

　　③ 利用聚合酶链式反应（PCR）特异性地扩增所需要的目的基因片段；

　　④ 化学合成。

　获得原核细胞的目的基因可采取直接分离，获取真核细胞的目的基因一般是人工合成，原因是原核生物基因中无内含子，而真核生物有内含子，在转录时要被剪切掉才能生成成熟的mRNA，动、植物中内含子的剪切方式不一样，如果用直接分离的基因将无法表达；而人工合成的基因是没有内含子的。

2．基因表达载体的构建--重组质粒的构建

（1）表达载体的组成：复制原点+目的基因+启动子+终止子+标记基因

① 复制起始位点即控制复制起始

的位点。原核生物DNA分子中只有一个复制起始点。而真核生物DNA分子有多个复制起始位点。

② 启动子：位于基因的首端的一段特殊的DNA片断，是RNA聚合酶识别和结合的部位，有了它才能驱动基因转录出mRNA，最终获得蛋白质，但启动子本身不被转录

③ 终止子：位于基因的尾端的一段特殊的DNA片断，能终止mRNA的转录

④ 目的基因中的标记基因最少要有2个，1个是用来检测运载体是否进入了受体细胞，另一个是用来检测目的基因是否被拼接到运载体上；第一个标志基因要保证其完整性，能够进行表达，若受体细胞表现出该基因所控制的性状，说明运载体已进入受体细胞；第二个标志基因是插入目的基因的部位，由于目的基因的插入破坏了其结构，不能表达其所控制的性状，若受体细胞没有表达出第二个基因所控制的性状，说明目的基因已进入受体细胞。常用的标记基因是抗生素基因。

（2）构建步骤：

　　①用一定的限制酶切割质粒，使其出现一个有黏性末端的切口。

　　②用，产生相同的黏性末端。

③将切下的目的基因片段，插入到质粒的切口处，再加入适量DNA连接酶，使质粒与目的基因结合成重组质粒。

3．将目的基因导入受体细胞