2018-2019学年北师大版选修一 第4章 第14课时 蛋白质的提取和分离 学案
2018-2019学年北师大版选修一  第4章 第14课时 蛋白质的提取和分离 学案第3页

子质量是相同的。

特别提醒 同工酶存在于生物的同一种属或同一个体的不同组织、甚至同一组织或细胞中。产生同工酶的主要原因是在进化过程中基因发生变异,而其变异程度尚不足以成为一个新酶。

二、乳酸脱氢酶同工酶的提取和分离

下面我们以乳酸脱氢酶同工酶的提取和分离为例,体验蛋白质的提取和分离技术。

1.乳酸脱氢酶同工酶的提取

(1)取5 g新鲜的动物心脏,漂洗干净后剪碎到预冷的玻璃匀浆器中,加入25 mL磷酸提取缓冲液,然后冰浴研磨成匀浆(如图1)。

(2)将匀浆收集到冰浴的离心管中,在4 ℃条件下12 000 rpm离心10 min。吸取上清液,然后在4 ℃条件下保存备用(如图2)。

2.琼脂糖凝胶电泳分离

(1)制备琼脂糖凝胶:用TBE电泳缓冲液配制质量分数为1%的琼脂糖凝胶,加热溶解后混匀,缓慢倒入胶床中,插入适当的梳子,室温冷却至凝胶凝固。拔出梳子,将凝胶放入电泳槽中,然后向电泳槽中加入适量TBE电泳缓冲液(如图3)。

(2)加样:取适量同工酶提取液与等量载样缓冲液(质量分数40%的蔗糖溶液、0.25%溴酚蓝)混匀,然后取20 μL加入样品孔内。

(3)电泳:100 V条件下进行电泳约30 min。

(4)染色:当溴酚蓝指示剂电泳到凝胶底部时切断电源,取出胶板浸入染色液中,37 ℃染色15~30 min,水洗后观察电泳结果。

3.结果分析