第二节　分子生物学技术

学习导航 明目标、知重点难点 尝试PCR(多聚酶链式反应)技术的基本操作。(重、难点)

体验PCR这一常规分子生物学实验方法。(难点)

理解PCR的原理，讨论PCR技术的应用。(重点)

　　 [学生用书P56])

　　一、阅读教材P83分析使用PCR仪的安全措施

　　1．严禁在PCR仪运行过程中打开池盖，否则会造成仪器的永久损坏。

　　2．仪器运行时，样品池及池盖内表面温度较高，当心灼伤。

　　3．仪器运行时，加热器内腔为高温、高压环境，严禁触及。

　　4．仪器运行过程中如果发出尖锐的刺刮声音，请立刻停止运行，检查是否有微量离心管断裂等故障。

　　5．仪器运行过程中如果没有反应，请切断电源，进行检查。

　　6．必须保持样品池内部的清洁，可用蘸有体积分数为95%的酒精棉签擦拭相关部位。

　　7．仪器必须放置在PCR实验室里，操作者在操作的时候必须遵循PCR实验室的相关规定，做好穿防护服、戴防护手套等相关防护措施。

　　8．当仪器接通电源后，打开外壳或移走部件可能会造成人员伤害，因此，在进行任何调整、替换、保养或维修之前，请切断所有的电源。

　　二、阅读教材P84完成多聚酶链式反应程序

　　1．物质准备：向离心管中加入模板DNA、引物和4种脱氧核苷酸以及TaqDNA聚合酶。

　　2．变性：在 94 ℃高温下，作为模板的双链DNA解旋为单链DNA。

　　3．退火(复性)：反应体系的温度降至 55 ℃，引物与单链DNA上的特定部位相互配对。

　　4．延伸：反应体系的温度回升到 72 ℃左右，按照单链DNA上的脱氧核苷酸序列，4种脱氧核苷酸按照碱基互补配对原则，在TaqDNA聚合酶的作用下连接到引物之后，使引物链延伸，形成互补的DNA双链。

　　三、阅读P85～87分析目的DNA片段的体外扩增与鉴定

　　1．DNA片段的PCR扩增

　　(1)准备器材：PCR仪、台式高速离心机、0.2 mL PCR微量离心管等。

(2)在0.2 mL PCR微量离心管中加入 5_μL_10倍浓缩的PCR缓冲液，4种脱氧核苷