1.培养基的配制

我们一般用LB液体培养基来扩大培养大肠杆菌，培养后再在LB固体培养基上划线进行分离。以下为本实验中培养基配制步骤，请完成：

(1)称量：准确称取各成分。蛋白胨0.5 g，酵母提取物0.25 g，氯化钠0.5 g，加水50 mL。

(2)融化：加热融化，用蒸馏水定容到 50 mL。配制LB固体培养基时还需加1 g琼脂，整个过程不断用玻棒搅拌，目的是防止琼脂糊底而导致烧杯破裂。

(3)调pH：用1 mol/L NaOH溶液调节pH至偏碱性。

(4)灭菌：在两个250 mL的三角瓶中分别装入50 mL LB液体培养基和50 mL LB固体培养基，加上棉塞。将培养皿用牛皮纸包好，放入灭菌锅内，1 kg压力灭菌15 min。

(5)倒平板：灭菌后，待固体培养基冷却至60 ℃左右时在酒精灯火焰附近进行操作。其过程(如下图)是：①将灭过菌的培养皿放在火焰旁，右手拿装有培养基的三角瓶，左手拔出棉塞；②右手拿三角瓶，使三角瓶口迅速通过火焰；③用左手将培养皿打开一条稍大于三角瓶口的缝隙，右手将培养基倒入培养皿，立刻盖上皿盖；④待平板冷却凝固后，将平板倒过来放置。

2.细菌的分离方法

(1)划线分离法：在液体培养基中，只要接种后培养8h，每毫升培养基中就有几亿个细菌。可用接种环蘸取菌液在固体培养基上划线，在划线过程中接种环上的菌液逐渐减少，因此，划线最后部分的细菌间的距离加大。将接种后的固体培养基培养10～20 h后，可由一个细菌产生单菌落。如果再将每个菌落分别接种至含有固体培养基的试管斜面上，在斜面上划线，则每个斜面的菌群就是由一个细菌产生的后代。这种方法也可用于分离细菌，将污染的杂菌除去。

(2)涂布分离法：先将培养的菌液稀释，通常稀释10－5～10－7倍，然后取0.1 mL稀释度不同的稀释液，加在培养皿的固体培养基上，用玻璃刮刀涂布在培养基平面上，然后进行培养。在适当的稀释度下，可培养得到相互分开的菌落。通常以每个培养皿中有20个以内的单菌落最为适合。

(3)两种分离法的比较：划线分离法，方法简单；涂布分离法，单菌落更易分开，但操作复杂些。

3.大肠杆菌的培养和分离

(1)实验内容：将大肠杆菌扩大培养和划线分离，即用LB液体培养基扩大培养大肠杆菌，培养后再在LB固体平面培养基上划线进行分离，随后培养基上就会形成一个个单独的菌落。