4、方法：常用的电泳方法有 和 。测定蛋白质分子量时通常使用 。

四、实验操作

1、样品处理:通过 、 、 等操作收集血红蛋白溶液。

(1)红细胞的洗涤：目的是 。分离时采取 ，直至上清液中没有 ，表明红细胞已洗涤干净。

(2)血红蛋白的释放：在 和 的作用下，红细胞破裂，释放出血红蛋白。

　　(3)分离血红蛋白溶液：把 离心后，将试管中的液体用 过滤、除去

　　 ，于 中静置片刻后，分离出下层的 。

2、粗分离：即透析

(1)方法：将血红蛋白溶液装入 ，将 放入一定量适宜浓度的 中，透析 。

(2)目的：将 的杂质除去。

(3)原理：透析袋能使小分子自由进出，而将大分子物质保留在袋内。

3、纯化:通过凝胶色谱柱将相对分子质量较大的杂质蛋白除去。操作如下：

(1)凝胶色谱柱的制作。

(2)凝胶色谱柱的装填

①材料：本实验使用的是 。

②方法：凝胶用 充分溶胀后。配成 ，一次性 倒人色谱柱内。不能有 存在；不能发生 流干露出凝胶颗粒的现象。

(3)样品的加入和洗脱

①a、准备：加样前，打开流出口，使柱内凝胶面上的 缓慢下降到与 平齐，关闭出口。

b、加样：用 小心地将1mL透析后的样品加到 的顶端，注意不要破坏 。

c、加样后：打开下端出口，使样品渗入 内。

②洗脱：加入 ，打开下端出口，进行 。

4、纯度鉴定：在鉴定的方法中，使用最多的是 。五、操作提示

1、红细胞的洗涤： 、 与 十分重要。 过少，无法除去血浆蛋白； 过高和 过长会使 等一同沉淀，达不到分离效果。