第二节基因工程的原理和技术

　　一、基因工程的基本原理

　　1．基本原理：让人们感兴趣的基因(即目的基因)在宿主细胞中稳定和高效地表达。

　　2．基因工程的变异类型：基因工程属于可遗传变异中的基因重组。

　　3．变异特点：实现性状定向改造。

　　二、基因工程的基本操作步骤

　　1．获得目的基因

　　(1)目的基因：人们所需要的基因，如人的胰岛素基因、植物的抗病基因等。

　　(2)获取方法：

　　①如果目的基因的序列是已知的，可用化学方法合成目的基因，或者用聚合酶链式反应(PCR)扩增目的基因。

　　②如果目的基因的核苷酸序列是未知的，可以建立一个包括目的基因在内的基因文库，从基因文库中找到目的基因。

　　2．形成重组DNA分子

　　(1)通常用相同的限制性核酸内切酶分别切割目的基因和载体DNA(如质粒)，形成相同的粘性末端。

　　(2)用DNA连接酶将目的基因和载体DNA连接在一起，形成重组DNA分子。

　　3．将重组DNA分子导入受体细胞

　　(1)常用的受体细胞：大肠杆菌、枯草杆菌、酵母菌和动植物细胞等。

(2)导入方法举例：用质粒作为载体，宿主细胞应该选择大肠杆菌，用氯化钙处理大