(2)子链扩增:需要引物,合成方向总是从子链的5′端向3′端延伸。
(3)解旋原理:DNA的热变性原理。在80~100_℃的温度范围内,DNA的双螺旋结构将解体,双链分开,这个过程称为变性。当温度缓慢降低后,两条彼此分离的DNA链又会重新结合成双链。
(4)条件
①模板:DNA的两条链。
②引物:分别与模板DNA两条模板链相结合的两种小的核酸片段。
③原料:A、T、G、C四种脱氧核苷酸。
④酶:耐热DNA聚合酶,一般用耐高温的TaqDNA聚合酶。
⑤其他条件:需要一定的缓冲溶液和能严格控制温度的温控设备。
3.PCR技术的过程
(1)变性
当温度上升到90 ℃以上时,双链DNA解旋为单链。
(2)复性
温度下降到50 ℃左右,两种引物通过碱基互补配对与两条单链DNA结合。
(3)延伸
温度上升到72 ℃左右,溶液中的四种脱氧核苷酸(A、T、C、G)在DNA聚合酶的作用下,根据碱基互补配对原则合成新的DNA链。
探讨:什么是引物?DNA复制时为什么需要引物?
提示:所谓引物是指两段与待扩增的DNA序列互补的一小段DNA或RNA片段。在DNA扩增时,DNA聚合酶不能从头开始合成DNA,只能从引物的3′端延伸DNA链,因此克隆DNA时应加入两种引物。