③酶:耐热的DNA聚合酶。
④引物:使DNA聚合酶能够从引物的3′端开始连接脱氧核苷酸。
⑤其他条件:需要稳定的缓冲溶液和能自动调节温度的温控设备等。
2.PCR过程与结果
(1)PCR过程
过程 温度 主要变化 变性 90 ℃以上 双链DNA解聚为单链 复性 50 ℃左右 两种引物通过碱基互补配对分别与两条单链DNA结合 延伸 72 ℃左右 溶液中的四种脱氧核苷酸(A,T,G,C)在DNA聚合酶的作用下,根据碱基互补配对原则合成新的DNA链
(2)PCR的结果
DNA聚合酶只能特异地复制处于两个引物之间的DNA序列,使这段固定长度的序列呈指数扩增。
1.PCR原理
PCR反应与体内DNA复制的引物在化学本质上是否相同?请分析原因。
答案 不相同。体内DNA复制所需引物为RNA聚合酶合成的一小段RNA,但PCR反应时所用引物一般是人工加入的一小段单链DNA。
2.PCR反应过程
(1)PCR反应中需要解旋酶和DNA聚合酶吗?若需要,则与细胞内DNA复制有何区别?
答案 PCR反应不需要解旋酶,但需要DNA聚合酶。由于PCR反应中需要高温使DNA解旋,因此PCR所需的DNA聚合酶能耐高温。
(2)PCR的每次循环中应如何控制温度?请分析原因。
答案 每次循环中先高温解旋,再低温使引物与模板结合,最后适当升温有利于Taq DNA聚合酶发挥作用。
(3)结合下图分析PCR过程中DNA复制的方向是怎样的?