(3)DNA连接酶是将两个DNA片段连接起来的酶，常见的有______________和______________，其中既能连接黏性末端又能连接平末端的是__________________。

答案　(1)Sau3AⅠ　两种酶切割后产生的片段具有相同的黏性末端　(2)甲、丙　甲中目的基因插入在启动子的上游，丙中目的基因插入在终止子的下游，二者的目的基因均不能被转录　(3)E·coliDNA连接酶　T4DNA连接酶　T4DNA连接酶

解析　(1)分析图(a)可知，限制性内切酶Sau3AⅠ与BamHⅠ切割DNA后形成的黏性末端相同，故经这两种酶切割得到的产物可以用DNA连接酶进行连接。(2)构建基因表达载体时，为保证目的基因能在宿主细胞中成功表达，目的基因应插入在启动子和终止子之间，据此可判断甲、丙均不符合要求，目的基因均不能表达。(3)常见的DNA连接酶有E·coliDNA连接酶和T4DNA连接酶，其中T4DNA连接酶既能连接黏性末端又能连接平末端。

限制性内切酶的选择方法

根据目的基因两端的限制性内切酶切点确定限制性内切酶的种类。

(1)应选择切点位于目的基因两端的限制性内切酶，如图甲可选择PstⅠ。

(2)不能选择切点位于目的基因内部的限制性内切酶，如图甲不能选择SmaⅠ。

(3)为避免目的基因和质粒的自身环化和随意连接，也可使用不同的限制性内切酶切割目的基因和质粒，如图甲也可选择用PstⅠ和EcoRⅠ两种限制性内切酶(但要确保质粒上也有这两种酶的切点)。

命题点二　运载体的应用分析

4．质粒是基因工程中最常用的运载体，它存在于许多细菌体内。质粒上有标记基因如图所示，通过标记基因可以推知外源基因(目的基因)是否转移成功。外源基因插入的位置不同，细菌在培养基上的生长情况不同，如图表示外源基因插入位置(插入点有a、b、c)，请根据表中