①过程：取1 mL的血红蛋白溶液装入透析袋中，将其放入盛有300 mL的物质的量浓度为20 mmol/L的磷酸缓冲液中(pH为7.0)，透析12 h。

　　②目的：将相对分子质量较小(填"大"或"小")的杂质除去。

　　③原理：透析袋能使小分子自由进出，而将大分子保留在袋内。

　　(3)纯化--凝胶色谱操作

　　①凝胶色谱柱的制作：

　　ⅰ取长40 cm，内径为1.6 cm的玻璃管，两端需用砂纸磨平。

　　ⅱ柱底制作：打孔→挖凹穴→安装移液管头部→覆盖尼龙网，再用100目尼龙纱包好。

　　ⅲ柱顶制作：打孔→安装玻璃管。

　　ⅳ组装：将上述三者按相应位置组装，并在下端出口连接带开关的尼龙管，尼龙管放入收集器。

　　②凝胶色谱柱的装填：

　　ⅰ色谱柱固定于支架上。

　　ⅱ干凝胶的计算和称量。

　　ⅲ溶胀：干凝胶用蒸馏水充分溶胀后，配成凝胶悬浮液。

　　ⅳ装填：打开下端出口，将凝胶悬浮液一次性缓慢倒入色谱柱内。

　　ⅴ洗涤平衡：装填完后，立即连接洗脱瓶，用20 mmol/L的磷酸缓冲液洗涤平衡凝胶12 h。

　　③样品的加入和洗脱：

　　调整缓冲液面：与凝胶面平齐

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　　滴加透析样品：用量为1 mL

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　　样品渗入凝胶床：样品完全进入凝胶层

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　　洗脱：打开下端出口，用磷酸缓冲液洗脱

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收集：待红色的蛋白质接近色谱柱底端时，用试管收集流出液，每5 mL收集一管，连续收集