实验操作----大肠杆菌的纯化培养：

　　本实验所用的培养基是 ，本实验可分成 和

两个阶段进行。

　　一制备牛肉膏蛋白胨固体培养基

1制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的操作步骤是：

、 、 、 、 。

　　〖思考5〗在制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的称量操作中，动作要迅速，原因是什么？

　　溶化操作中需要不断用玻璃棒搅拌的目的是什么？

　　〖思考6〗牛肉膏和蛋白胨主要为微生物提供什么等营养物质？

　　2． 倒平板：待培养基冷却至 ℃左右时在酒精灯火焰附近操作进行。

　　其过程是：

　　①在火焰旁右手拿 ，左手 ；

　　②使锥形瓶的瓶口 ；

　　③左手将培养皿 ，右手 ，立刻盖上皿盖。

　　④待平板冷却凝固后，将平板 。

　　〖思考7〗锥形瓶的瓶口通过火焰的目的是什么？

　　〖思考8〗倒平板的目的是什么？

　　〖思考9〗若皿盖和皿底之间粘有培养基，则该平板能否培养微生物？为什么？

　　〖思考10〗配制斜面培养基作用是什么？，试管为什么要加塞棉塞？

二、纯化大肠杆菌

　　 微生物接种：最常用的是 法和 法。另外还有穿刺接种和斜面接种等。

1．平板划线法是 的操作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面。

　　其操作步骤是：①将 在酒精灯火焰上灼烧直至 。②在酒精灯火焰旁冷却接种环，并打开大肠杆菌的菌种试管的棉塞。③将菌种试管口通过火焰达到 的目的。④将冷却的接种环伸入到 。⑤将菌种试管口再次通过火焰后塞上棉塞。⑥将皿盖打开一条缝隙，把接种环 ，盖上皿盖，不要划破培养基。⑦灼烧接种环，冷却后从 划线。重复上述过程，完成三、四、五区域内划线。注意不要将 相连。

　　⑧将平板 培养。

　　〖思考11〗取菌种前灼烧接种环的目的是什么？ 为什么除第一次划线外，其余划线前都要灼烧接种环？ 取菌种和划线前都要求接种环冷却后进行，其目的是？

最后灼烧接种环的目的是？ 在第1次划线后都从上次划线末端开始的目的是？