微生物生长量的测定有计数法、重量法、生理指标法等方法,但是一般使用计数法,计数法可分为直接计数法和间接计数法。二者的比较如表所示:
项目 直接计数法 间接计数法 原理 利用特定血细胞计数板,在显微镜下计算一定容积的样品中微生物的数量 当样品的稀释度足够高时,培养基表面生长的一个菌落,来源于样品稀释液中的一个活菌。通过统计平板上的菌落数,就能推测出样品中大约含有多少活菌 主要用具 显微镜、血细胞计数板 培养基 计数依据 菌体本身 培养基上菌落数 优点 计数方便、操作简单 计数的是活菌 缺点 死菌、活菌都计算在内 操作较复杂,有一定误差 计算公式 每毫升原液含菌数=400×104×每小格平均菌体数×稀释倍数① 每毫升原液含菌数=培养基上平均菌落数÷涂布液体积×稀释倍数 注:①400、104是常数。
3.实验设计原则
(1)单一变量原则。对照实验中除测试因素(自变量)不同外,其他因素要保证和实验组相同。
(2)平行重复原则。任一稀释度至少涂布3个平板,以增强实验结果的可信度与准确性。
(3)对照原则。
①判断培养基是否有杂菌污染,需要将未接种的相同培养基在相同条件下同时进行培养。
②判断培养基是否起到了筛选的作用,需要同时设立牛肉膏蛋白胨培养基进行同样接种后培养,观察两种培养基上的菌落数目是否有显著差异。
[对点演练]
1.下列关于统计菌落数目方法的叙述,错误的是( )
A.当样品的稀释度足够高时,一个活菌会形成一个菌落
B.为了保证结果准确,一般采用菌落密度较大的平板进行计数
C.采用稀释涂布平板法计数获得的菌落数往往少于实际的活菌数
D.在某一浓度下涂布三个平板,若三个平板统计的菌落数差别不大,则应以它们的平均值作为统计结果
解析:选B 当样品的稀释度足够高时,一个活菌会形成一个菌落;为了保证结果准确,一般选取菌落数在30~300之间的平板进行计数;采用稀释涂布平板法计数获得的