①目的:经过离心使血红蛋白与其他杂质分离开来,便于下一步对血红蛋白的纯化。
②过程
混合液―→离心管2 000 r/min10 min溶液分层滤纸过滤 除去脂溶性沉淀层―→分液漏斗静置,分出下层的红色透明液体(血红蛋白溶液)
③结果(填表)
2.粗分离--透析
(1)目的:除去样品中相对分子质量较小的杂质或用于更换样品的缓冲液。
(2)原理:透析袋能使小分子自由进出,而将大分子保留在袋内。
(3)操作:1 mL血红蛋白溶液\s\up7(装入(装入)透析袋\s\up7(放入(放入)300 mL物质的量浓度为20 mmol/L的磷酸缓冲液中(pH为7.0)―→透析12 h。
3.纯化--凝胶色谱操作
(1)凝胶色谱柱的制作
①取长40 cm,内径为1.6 cm的玻璃管,两端用砂纸磨平。
②柱底部制作:橡皮塞打孔→挖出凹穴→安装移液管头部→覆盖尼龙网,再用100目的尼龙纱将橡皮塞上部包好。
③柱顶部制作:橡皮塞打孔→安装玻璃管。
④将上述三部分按相应位置组装成一个整体。
⑤安装其他附属结构。
(2)凝胶色谱柱的装填
(3)样品的加入和洗脱