最后一次 -- 　-- 72℃,7min 注：反应产物在4℃保存

　　4．检测扩增效果

　　（1）稀释样品10倍

　　（2）以H2O作对照，在波长260nm处，将紫外分光光度计读数调到零。

　　（3）加入到厚度为1cm的比色杯中，测定260nm处的光吸收值

　　（4）DNA浓度（μg/mL）=（A260nm/0.02）×稀释倍数

　　三．探究活动

　　 PCR实验虽然操作简单，但实验设备及药品价格较高，可以利用自己准备的简易材料，设计并进行PCR技术的模拟实验操作。

　　 四．PCR技术意义

　　PCR能 ，从而有效地解决了因为样品中DNA含量 而难以对样品进行分析研究的难题，大大提高了对DNA分子的分析和检测能力，被广泛应用于 、基因序列分析、遗传病诊断，古生物学研究以及形侦破案、亲子鉴定等。

　　五．小知识：

　　1．DNA的两条链是反向平行的，为了明确地表示DNA的方向，通常将DNA的羟基(-OH)末端称为5'端。DNA聚合酶不能从头开始合成DNA，而只能从3'端延伸DNA链。但DNA合成的方向是从子链的5'端向3'端延伸。

　　2．引物是一段RNA，它能与DNA母链的一段碱基序列互补配对。用于PCR的引物长度通常为20-30个核苷酸。

　　3．在80ºC-100ºC的温度范围内，DNA的双螺旋结构将解体，双链分开，这个过程称为变性。当温度缓慢降低后，两条彼此分离的DNA链又会重新结合成双链。

[复习指导]

　　本节课复习要注重细胞内DNA复制过程和体外DNA片段的扩增--PCR技术的过程，运用DNA复制过程原理相同的方法，明确体外DNA片段的扩增--PCR技术在基因克隆、基因序列分析、遗传病诊断，古生物学研究以及形侦破案、亲子鉴定等方面的地位和作用。如何在体外创设细胞内DNA复制的条件是PCR技术的关键，细胞内的各种条件实际上是利用PCR仪来模拟的。PCR仪原理复杂，操作简单。

[典例解析]

　　1.PCR过程与细胞内的DNA复制过程相比，主要有两点不同，它们是（ ）

①PCR过程需要的引物是人工合成的DNA单链

②PCR过程不需要DNA聚合酶

③PCR过程中DNA的解旋不依靠解旋酶，而是通过对反应温度的控制来实现的

④PCR过程中，DNA不需要解旋，直接以双链DNA为模板进行复制

　 A． ①②③④ B． ①② C．①③ D．②④

　　[解析] PCR过程与细胞内的DNA复制过程相比，主要有两点不同。第一，PCR过程需要的引物不是RNA，而是人工合成的DNA单链，其长度通常为20－30个脱氧核苷酸。第二，PCR过程中，DNA解旋不依赖解旋酶，而是通过对反映温度的控制来实现的。

　　 [答案] C。

　　2．在PCR扩增前，需要将下列哪些物质加入微量离心管中？（ ）

①模板DNA ②模板RNA ③DNA解旋酶 ④耐高温的DNA聚合酶 ⑤引物 ⑥PCR缓冲液