片段的核酸合成技术。
PCR的原理:
利用DNA双链复制的原理,将基因的核苷酸序列不断加以复制,使其数量呈指数方式增长。
PCR技术的过程:
* 变性:目的基因DNA加热至90-950C变性形成单链DNA;
* 退火:温度降低至55-600C引物与互补DNA链结合;
* 延伸:适当升温至70-750C,在DNA聚合酶作用下从引物起始进行互补链的合成。
条件:
已知目的基因的核苷酸序列(前提条件)
热稳定的DNA聚合酶(Tap)
四种脱氧核苷酸
引物
③通过DNA合成仪直接合成目的基因
当基因比较小、蛋白质的氨基酸序列可以测得或核苷酸序列已知时,可采用此种方法。
2、基因表达载体的构建
1)目的:
使目的基因在受体细胞中稳定存在,并且可以遗传给下一代,同时使目的基因能够表达和发挥作用。
2)基因表达载体的组成:
* 目的基因
启动子:一段有特殊结构的DNA片段,位于基因的首端,是RNA聚合酶识别和结合的部位,有了它才能驱动基因,转录出mRNA最终获得所需要的蛋白质。