①细胞贴壁:细胞悬液中分散的细胞很快就贴附在瓶壁上,称为细胞贴壁。培养贴附性细胞时,细胞要能够贴附于底物上才能生长繁殖,这就要求培养瓶或培养皿的内表面光滑、无毒,易于贴附。
②接触抑制:细胞数目不断增多,当贴壁细胞分裂生长到表面相互接触时,细胞就会停止分裂增殖,这种现象称为细胞的接触抑制。打破接触抑制现象的方法是将贴满瓶壁的细胞重新用胰蛋白酶等处理,然后分瓶继续培养,让细胞继续增殖。
(2)原代培养与传代培养
①原代培养:动物组织消化后的初次培养。
②传代培养:贴满瓶壁的细胞需要重新用胰蛋白酶等处理,然后分瓶继续培养,让细胞继续增殖,这样的培养过程通常被称为传代培养。10代以内的细胞可保持正常的二倍体核型。细胞传至10~50代左右时,会出现核型异常,细胞增殖会明显减缓,甚至完全停止。当继续传代培养时,少部分细胞会克服细胞寿命的自然极限,获得不死性。
2.动物细胞培养过程中的重点剖析
(1)动物细胞培养的原理是细胞增殖。
(2)选材:选用幼嫩的动物组织块较好,因为幼嫩组织细胞的分化程度低,增殖能力强,更容易培养。
(3)分散组织细胞:从健康动物体内取出组织块,先剪碎组织,目的是增大胰蛋白酶或胶原蛋白酶与细胞的接触面积;然后用胰蛋白酶或胶原蛋白酶处理一段时间,这样组织就会分散成单个细胞。
(4)传代培养中酶的选择
进行动物细胞传代培养时用胰蛋白酶分散细胞,说明细胞间的物质主要是蛋白质。多数细胞培养的适宜pH为7.2~7.4,胃蛋白酶