概念 使用较为温和的物理或化学方法杀死物体表面或内部的部分微生物(不包括芽孢和孢子) 使用强烈的理化因素杀死物体内外所有的微生物(包括芽孢和孢子) 常用方法 煮沸消毒法、巴氏消毒法、化学药剂消毒法、紫外线消毒法 灼烧灭菌、干热灭菌、高压蒸汽灭菌 适用对象 操作空间、操作者双手等 接种环、接种针、玻璃器皿、培养基等 　　3.大肠杆菌的纯化培养

　　(1)制备牛肉膏蛋白胨固体培养基

　　①

　　②培养基应采用高压蒸汽灭菌；倒平板时要待培养基冷却至50 ℃左右时，在酒精灯火焰附近进行，等平板冷凝后将平板倒置。

　　(2)纯化大肠杆菌

　　①纯化培养的原理：想方设法在培养基上得到由一个细胞繁殖而来的肉眼可见的菌落，即获得较纯的菌种。

　　②纯化培养方法：在牛肉膏蛋白胨培养基上纯化大肠杆菌，最常用的方法有平板划线法和稀释涂布平板法。

　　ⅰ平板划线法：通过接种环在琼脂固体培养基表面连续划线的操作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面。

　　ⅱ释释涂布平板法：将菌液进行一系列的梯度稀释，然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面，进行培养。

　　③培养：将接种后的培养基和一个未接种的培养基都放入37 ℃恒温箱中，培养12 h和24 h后，分别记录观察。

　　④菌种保存：

临时保藏法 甘油管藏法 适用对象 频繁使用的菌种 长期保存的菌种 培养基类型 固体斜面培养基 液体培养基 温度 4 ℃ －20 ℃ 方法 菌落长成后放入冰箱中保存，以后每3～6个月将菌种从旧的培养基上转移到新鲜的培养基上 将培养的菌液与等体积灭菌后的甘油混合均匀后放在冷冻箱内保存