(2)点样:点层析试样是决定实验能否取得理想效果的重要操作。将饱和FeCl3和CuSO4混合液按1∶1的体积比配成溶液。用毛细管吸取样品溶液,在离滤纸条一端2 cm处点一直径为0.3~0.5 cm左右的斑点。注意斑点尽可能小。如果色斑颜色很浅,待溶液挥发后,在原处重复点样。重复点样3~5次后晾干备用。
(3)展开:另取一支试管,加入9 mL丙酮和1 mL 6 mol·L-1盐酸,混合均匀,作为展开剂。将点过样的滤纸条平整地悬挂在橡皮塞下的钩子上,不可触及试管内壁;滤纸条下端浸入展开剂中约1 cm,试样斑点必须在展开剂液面之上,塞紧橡皮塞。展开剂借助毛细作用逐渐向上移动,样品中各组分因向上移动速度不同而随之展开。若大试管太长,滤纸无法触及展开剂液面,可用小烧杯代替大试管。用铁丝横穿过滤纸,架在烧杯上方。调节完滤纸高度后,盖上培养皿形成气室。
(4)显色:FeCl3和CuSO4混合液经展开后得到不同颜色的色斑。为使观察效果更明显,采用氨熏显色。
(5)分离:若要将层析分离物质提取出来,可将滤纸上的分离物质的斑点剪下,浸于有关溶剂中,可提取纸上的层析物。
对点集训
1.下列关于纸层析的说法中不正确的是( )
A.纸层析以滤纸作为惰性支持物
B.应沿试管壁小心地将展开剂慢慢倒入试管底部
C.纸层析的实质是试样中的各组分在两相之间产生不同分配
D.点样后的滤纸需晾干后,才能将其浸入展开剂中
解析:选B 向试管中加入展开剂时,展开剂不能沾到试管壁,故B项错误。
2.油墨是由多种色素按一定比例混合而成,某同学欲用纸层析的方法将其主要色素分离开来,可用作展开剂的物质是( )
A.盐酸 B.酒精
C.NaOH溶液 D.丙酮+盐酸
解析:选D 纸层析中要求流动相溶剂对分离物质应有适当的溶解度。
拓展实验
菠菜的叶绿体中色素的提取和分离
1.实验操作
(1)取材:选取叶片深绿色或墨绿色的菠菜,这种菠菜叶绿体含量相对较高。另外,为减少提取液中的水分,可将选择好的材料去掉叶柄,放置一段时间,晾干到一定程度。
(2)叶片的研磨:研磨时,加入少量的石英砂,目的是加快研磨,促使细胞破裂;加入碳酸钙是为了中和细胞液中的有机酸,防止色素被破坏;加入丙酮是为了提取研磨出来