b．用棉线捆住将要在第二天开花的花朵，不让花朵自动开放。

c．第二天清晨给花朵进行人工授粉，授粉后套袋，作好标记。

d．0.5～1 h后用一定浓度的DNA溶液涂抹柱头。

e．收获种子，种植，进行抗虫性检测。

(3)特点

①优点：简单经济、快捷实用，且不受植物基因型的限制，理论上适用于任何开花植物。

②缺点：工作效率较低，且后代的遗传情况较复杂。

2．氯化钙法

(1)适用条件：运载体是质粒，受体细胞是大肠杆菌。

(2)作用原理：氯化钙使大肠杆菌细胞成为感受态细胞，细胞膜的通透性发生变化，允许含有目的基因的运载体分子进入。

(3)过程

(4)结果：短时间内获得大量的目的基因及目的基因的表达产物。

3．农杆菌介导的遗传转化法

(1)农杆菌：是一种土壤细菌，侵染植物细胞后，会使植物组织形成肿瘤，受感染的细胞可产生正常细胞不能产生的生物碱，是农杆菌生长所必需的碳源和氮源。

(2)原理：农杆菌的Ti质粒上的T­DNA可以转移到受体细胞，插入植物基因组，引起植物细胞的变化。

(3)过程：目的基因插入到Ti质粒的T­DNA上\s\up7(进入(进入)农杆菌→导入植物细胞→稳定维持和表达。

(4)应用：在植物转基因技术中占据主导地位，特别是在双子叶植物上尤为普遍。

(5)优点：转化频率高、成本低、操作简单，而且转基因后代的遗传组成比较容易分析。

4．基因枪法

将连接到载体上的目的基因的DNA溶液与金粉或钨粉共同保温，使DNA吸附于金属颗