ⅲ原料:A、T、G、C四种脱氧核苷酸。
ⅳ酶:耐热DNA聚合酶,一般用耐高温的TaqDNA聚合酶。
ⅴ其他条件:需要一定的缓冲溶液和能严格控制温度的温控设备。
(3)PCR技术的过程
①变性
当温度上升到90 ℃以上时,双链DNA解旋为单链。
②复性
温度下降到50 ℃左右,两种引物通过碱基互补配对与两条单链DNA结合。
③延伸
温度上升到72 ℃左右,溶液中的四种脱氧核苷酸(A、T、C、G)在DNA聚合酶的作用下,根据碱基互补配对原则合成新的DNA链。
2.PCR的实验操作及操作提示
(1)实验用具
①PCR仪:该仪器能自动调控温度,实现DNA的扩增。如果没有PCR仪,可用3个恒温水浴锅代替,操作时按程序在3个水浴锅中来回转移PCR反应的微量离心管。
②微量离心管:总容积为0.5 mL,实际上是进行PCR反应的场所。
③微量移液器:用于向微量离心管中转移PCR配方中的液体。
(2)实验操作程序
准备:按照PCR反应体系的配方将所需试剂摆放于实验桌上
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移液:用微量移液器按照配方在微量离心管中依次加入各组分
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混合:盖严离心管口的盖子,用手指轻轻弹击管壁,使反应液混合均匀