2019-2020学年人教版生物选修一讲义:专题5 课题2 多聚酶链式反应扩增DNA片段 Word版含答案
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  ⅲ原料:A、T、G、C四种脱氧核苷酸。

  ⅳ酶:耐热DNA聚合酶,一般用耐高温的TaqDNA聚合酶。

  ⅴ其他条件:需要一定的缓冲溶液和能严格控制温度的温控设备。

  (3)PCR技术的过程

  ①变性

  当温度上升到90 ℃以上时,双链DNA解旋为单链。

  

  ②复性

  温度下降到50 ℃左右,两种引物通过碱基互补配对与两条单链DNA结合。

  

  ③延伸

  温度上升到72 ℃左右,溶液中的四种脱氧核苷酸(A、T、C、G)在DNA聚合酶的作用下,根据碱基互补配对原则合成新的DNA链。

  

  2.PCR的实验操作及操作提示

  (1)实验用具

  ①PCR仪:该仪器能自动调控温度,实现DNA的扩增。如果没有PCR仪,可用3个恒温水浴锅代替,操作时按程序在3个水浴锅中来回转移PCR反应的微量离心管。

  ②微量离心管:总容积为0.5 mL,实际上是进行PCR反应的场所。

  ③微量移液器:用于向微量离心管中转移PCR配方中的液体。

  (2)实验操作程序

  准备:按照PCR反应体系的配方将所需试剂摆放于实验桌上

   ↓

  移液:用微量移液器按照配方在微量离心管中依次加入各组分

  ↓

混合:盖严离心管口的盖子,用手指轻轻弹击管壁,使反应液混合均匀