（1）相同点：都缝合磷酸二酯键

（2）区别：E．coIiDNA连接酶来源于大肠杆菌，只能使黏性末端之间连接；

T4DNA连接酶来源于T4噬菌体能缝合两种末端，但连接平末端之间的效率较低。

2、DNA连接酶与DNA聚合酶作用的比较

DNA连接酶 DNA聚合酶 不同点 连接的DNA 双链 单链 模板 不要模板 要模板 连接的对象 2个DNA片段 单个脱氧核苷酸加到已存在的单链DNA片段上 相同点 作用实质 形成磷酸二酯键 化学本质 蛋白质

(三) 载体 "分子运输车"

1、载体的作用：载体是基因运输工具，在基因操作过程中，使用载体有两个目的：一是用它作为运载工具，将目的基因送到宿主细胞中去；二是利用它在宿主细胞内对目的基因进行大量复制。

2、载体必须具备三个条件：

（1）能在受体细胞中复制并稳定保存。

（2）具有一至多个限制酶切割位点，供外源DNA片段插入。

（3）具有某些标记基因，以便进行筛选。

3、载体的种类： 质粒 、 噬菌体 和 动、植物病毒 等。

最早应用最常应用的载体是质粒，它是细菌细胞中的一种很小的双链环状DNA分子。

三、基因工程的基本过程

(一) 获得目的基因（目的基因的获取）

1、获取方法主要有两种：（1）从自然界中已有的物种中分离出来，如可从基因文库中获取。

　　　　　　　　　　　（2）用人工的方法合成。

★获得原核细胞的目的基因可采取直接分离，获取真核细胞的目的基因一般是人工合成。

★人工合成目的基因的常用方法有反转录法和化学合成法。

2、利用PCR技术扩增目的基因

（1）PCR的含义：是一项在生物体外复制特定DNA片段的核酸合成技术。

（2）目的：获取大量的目的基因

（3）原理：DNA双链复制

（4）过程：第一步：加热至90～95℃ DNA解链为单链；

第二步：冷却到55～60℃，引物与两条单链DNA结合；

第三步：加热至70～75℃，热稳定DNA聚合酶从引物起始进行互补链的合成。